植物显微技术(经典完整版).docxVIP

植物显微技术 1、任课教师： 李岩、刘朝辉（中国农业大学生物学院） 2、课程内容及安排： (1) 植物制片技术 (2) 光学显微镜技术 从校历的第6周起每周一次实验，分3组，每组不超过16人。实验时间（周四下午2：00，周五上午8：30，周五下午2： 00 ）。实验地点：新教学楼1325（显微技术室）。 3、教材及参考书： （1）生物学显微技术，余炳生、张仪编著。 （2）植物显微技术实验指导，余炳生、张仪、李岩编著。 第一部分植物制片技术 第一部分植物制片技术 第一章概论 第一节制片的目的及意义 一、人类对自然的认识过程 二、显微镜在人类认识自然中的作用 三、制片技术在显微镜应用中的必要性 一 1、 a、 b、 2、 a、 b、 c、 第二节植物制片技术的分类与发展 第二节植物制片技术的分类与发展 、植物制片的分类 按保存时间可分为 临时制片 永久制片 按制作方法可分为 活体观察 切片法 非切片法 二、植物制片技术的发展 二、植物制片技术的发展 1 、固定剂及固定方法的改进 2 、塑料包埋剂的应用与发展 3 、荧光及免疫荧光定位技术的应用与发展 4 、活细胞显微观察技术的应用与发展 5 、 GFP(Green Fluorescence Protein ，绿色荧光蛋白 ) 技术 的应用 第二章植物制片的基本步骤和原理 第二章植物制片的基本步骤和原理 第一节选材 一、选材的原则 二、选材注意事项 三、一般植物材料的切取 根、茎的切取 叶的切取 材料的体积问题 第二节杀死、固定和保存 第二节杀死、固定和保存 一、杀死、固定和保存的概念 1 、基本概念 杀死：利用某种方法使细胞的新陈代谢瞬时停止。 固定：在杀死的基础 上，把细胞或组织按生活的状态固 定下来，使在以后制片的过程中保持状态不变。 2 、杀死与固定的关系 3 、保存与保存液 70 % 乙醇 4 、制片的核心问题 如何在制片过程中保持生命的真实结构？！ 二、固定的理论 二、固定的理论 ( 一 ) 两类固定剂 1 、非凝固型固定剂：使蛋白相互胶联。 2 、凝固型固定剂：使蛋白沉淀。 ( 二 ) 固定的目的和理想的固定剂 1 、固定的目的 2 、理想的固定剂（？） 一般而言：非凝固型固定剂优于凝固型固定剂；混合固定剂 一般而言：非凝固型固定剂优于凝固型固定剂；混合固定剂 优于单纯固定剂。 三、固定剂 三、固定剂 ( 一 ) 凝固型固定剂 1 、酒精 ( ethyl ， alcohol) 常用 95 % 酒精及纯酒精 特点、使用范围、作用原理及注意事项 2 、铬酸 ( chromic acid) 特点：易潮解，为强氧化剂 缺点：渗透力弱，易使组织发生收缩 一般与其它成分配成混合固定液 3 、苦味酸 ( picric acid ) 特点：渗透力弱，易使组织发生收缩，易爆炸 一般与其它成分配成混合固定液 注意事项：一般用 50 % 、 70 % 酒精清洗 4 、 醋酸 ( acetic acid ) 特点：渗透力强，可使组织产生膨胀作用 ( ( 二 ) 非凝固型固定剂 1 、甲醛 ( formalin ) 特点：气体，在水中的溶解度为 38 % 左右，很好的硬化剂，强还原剂；渗透力弱。 2 、重铬酸钾 ( potassium dichromate ) 特点：强氧化剂，强硬化剂；渗透力弱。 常与其它固定剂配合使用。 3 、 锇酸 ( osmic acid) 特点：强氧化剂，中性；渗透力极弱。 电镜固定常用的固定剂；也是唯一能固定脂类分子的最好的化学固定剂。 4 4 、 多聚甲醛 ( paraformaldehyde ) 特点：白色固体，固定能力较弱，可以保持酶及蛋白的活性。 免疫荧光定位常用；一般用缓冲液配制成 4 % 的固定液。 5 、 戊二醛 ( glutaraldehyde ) 特点：能与蛋白质分子的氨基和肽键连接形成交连；是最常用的非凝固型固定 剂。可以部分保持酶和蛋白质的活性。固定能力比甲醛强。常用于电镜制片的固 定；用缓冲液配制。 ( ( 三 ) 混合型固定液 混合型固定剂的内涵 混合原则： a 、优缺点互补； b 、膨胀与收缩相互平衡； c 、强氧化剂与还原剂应分别配置。 1 、 酒精 - 甲醛液 70 % 酒精 100 ml 甲醛 2 -10 ml 特点：不易收缩，过去常用于固定花粉管。 2 、 甲醛 - 醋酸 - 酒精液 ( FAA ) 50 % 或 70 % 酒精 9 0 ml 冰醋酸 5 ml 甲醛 5 ml 特