分子生物学常用技术杂交.ppt

转移缓冲液 * PPT课件 * PPT课件 * PPT课件 121204 cell clones DNA digested with EcoRI 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 m 11 12 13 14 15 16 17 18 19 1: 1 2: 3 3: 12 4: 38 5: 40 6: 41 7: 56 8: 63 9: 65 10: 67 M: 1kb marker 11: 74 12: 75 13: 76 14: 77 15: 78 16: 95 17: 98 18: 101 19: 235 * PPT课件 Assay the copy number of provirus in HT1080 with Southern blot 19 18 17 16 15 14 13 12 11 M 10 9 8 7 6 5 4 3 2 1 1: 1 2: 3 3: 12 4: 38 5: 40 6: 41 7: 56 8: 63 9: 65 10: 67 M: 1kb ladder 11: 74 12: 75 13: 76 14: 77 15: 78 16: 95 17: 98 18: 101 19: 235 * PPT课件 121004 cell clones DNA digested with EcoRI 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 m 11 12 13 14 15 16 17 18 19 1: 54 2: 96 3: 97 4: 224 5: 231 6: 232 7: 233 8; 235/nondigested 9: 236 10: 239 M: 1kb ladder 11: 240 12: 244 13: 245 14: 248 15: 252 16: 286 17: 290 18: 301 19: 313 * PPT课件 Assay the copy number of provirus in HT1080 with Southern blot 19 18 17 16 15 14 13 12 11 M 10 9 8 7 6 5 4 3 2 1 1: 54 2: 96 3: 97 4: 224 5: 231 6: 232 7: 233 8; 235/undigested 9: 236 10: 239 M: 1kb marker 11: 240 12: 244 13: 245 14: 248 15: 252 16: 286 17: 290 18: 301 19: 313 * PPT课件 Northern印迹杂交（Northern blotting） 这是一种将待测RNA从琼脂糖凝胶中转印并固定到膜上、然后再与已知的DNA或RNA探针杂交的方法。 DNA印迹技术由Southern于1975年创建，称为Southern印迹技术，RNA印迹技术正好与DNA相对应，故被称为Northern印迹杂交。 Northern? 印迹杂交的RNA转移与Southern印迹杂交的DNA转移方法类似，只是在进样前用甲基氢氧化银、乙二醛或甲醛使RNA变性，而不用NaOH，因为它会水解RNA的2-羟基基团。 RNA + DNA /RNA杂交 * PPT课件 用途： 1): 基因表达(mRNA)定性定量 2): transcripts(mRNA) splicing 探针: DNA、RNA 探针 Northern印迹杂交 * PPT课件 Northern blotting * PPT课件 RNA甲醛凝胶电泳和吸印方法 1. 试剂： 10×MSE缓冲液：0.2mol/L吗啉代丙烷磺酸（MOPS），pH7.0，50mmol/L醋酸钠，1mmol/L?? EDTA? pH8.0。 5×载样缓冲液：50%甘油，1mmol/L EDTA，0.4%溴酚蓝。 甲醛：用水配成37%浓度（12.3mol/L），应在通风柜中操作，pH高于4.0。 20×SSC； 去离子甲酰胺； 50mmol/L NaOH(含10mmol/L NaCl)； 0.1mol/L Tris，pH7.5。 * PPT课件 2.电泳步骤： （1）40ml水中加0.7g琼脂糖，煮沸溶解，冷却到60℃，加7ml10×MSE缓冲液, 11.5ml 甲醛，加水定容至70ml，混匀后倒入盛胶槽