前列腺的免疫组化标志物.ppt

Shi（1991）等报告：微波炉照射的切片，能够激活部分核内抗原活性。其机制不清，可能与高温、高热的作用，使核内DNA双链解开，DNA、RNA解离，抗原暴露有关。其步骤为：将切片脱蜡水洗后，置染色瓶中，加入去离子水或缓冲液至瓶颈处，反复多次照射，每次1min，照射5～10次，每次照射后，补充瓶中蒸发掉的液体，照射温度不超过90～95℃为宜。此处理后，细胞核染色以苏木精为佳 * PPT课件 第二节　染色方法 一、本科标抗体法 酶标抗体技术是通过共价键将酶连结在抗体上，制成酶标抗体，再借酶对底物的特异催化作用，生成有色的不溶性产物或具有一定电子密度的颗粒，于光镜或电镜下进行细胞表面及细胞内各种抗原成分的定位。 * PPT课件 （一）酶的种类及特点 从理论上讲，用细胞化学方法能显示的酶，均可用于标记抗体，进行ICC染色，但实际上在ICC中所能用的酶并不多。现将常用的几种酶列于表4-1，供选用时参考。 * PPT课件 * PPT课件 Sternberger(1986)指出，用于标记的酶应具备以下几点①酶催化的底物必须是特异的，且容易被显示，所形成的产物易于光镜或电镜下观察；②所形成的终产物沉淀必须稳定，即终产物不能从酶活性部位向周围组织弥散，影响组织学定位；③较易获得的酶分子，最好有商品出售；④中性pH时，酶应稳定，酶标记抗体后，保存1～2年活性不应改变，且酶的催化活性（Turnover）越高越好；⑤酶标过程中，酶与抗体连结，不能影响二者的活性；⑥被检测组织中，不应存在与标记酶相同的内源性酶或类似物质。 * PPT课件 （二）本科标抗体的制备（Boosma,DM, 1983） 酶标抗体与荧光色素标记抗体不同，它需借助桥-偶联剂的作用，将酶连结在抗体分子上。偶联剂是一种双功能试剂，具备3个基本特征：①偶联剂与抗体和酶之间的连结，必须是不可逆的，即借共价键连结；②偶联剂不应影响酶和抗体的活性；③不能因偶联剂的加入，使酶与组织成分了生非特异结合。 抗体制作步骤未列出 * PPT课件 PPT课件 PPT课件 前列腺癌的免疫组化标记物 * PPT课件 1 前列腺特异性抗原 前列腺特异性抗原(prostate specific antigen，PSA)是分子量34000的单链糖蛋白，由237个氨基酸构成，它是一种丝氨酸蛋白酶，使凝固的精液溶解、液化。它是在1979年作为前列腺腺上皮细胞的标志物被发现的。血清PSA目前已被广泛应用于前列腺癌的早期筛查。 * PPT课件 PSA在正常前列腺、前列腺增生、前列腺癌、前列腺上皮内瘤，均呈阳性表达，定位于上皮细胞的胞质中，而在前列腺转移癌则呈阴性表达，因此PAS阳性提示肿瘤来自前列腺上皮，可用于区分前列腺癌与前列腺转移癌[5]。PSA在前列腺良、恶性病变中均呈阳性表达，故PSA不能用于鉴别良恶性病变。几乎所有的前列腺癌（除了分化最差的癌和少数激素治疗后复发的进展期癌以外）PSA标记都阳性，而高分化前列腺癌的PSA表达强于低分化前列腺癌, 表明PSA表达与分化程度有关。而对于分化很差的癌，即使PSA阴性也不能完全排除前列腺癌，还要结合其他检查综合考虑。偶尔PAS阳性可出现在前列腺以外的组织和肿瘤，但一般为局灶性弱阳性 [6]。 * PPT课件 [5]Harvey AM, Grice B, Hamilton C, et a1. Diagnostic utility of p504s/p63 cocktail, prostate-specific antigen, and prostatic acid phosphatase in Verifying prostatic carcinoma involvement in seminal Vesicles: a study of 57 cases of radical prostatectomy, speciments of pathologic stage pT3b[J]. Arch Pathol Lab Med,2010,134(7):983-988. [6]Bostwick D G, Qian J, Ramnani D M. Immunohistochemistry of the prostate and bladder, testis and renal tumors. In: Dabbs D J, ed. Diagnostic Immunohistochemistry. Philadelphia: Churchill Livingstone, 2002.407-33 * PPT课件 CK34βEl2 1984年，Gown等[7]首先报道了CK34βEl2，它是一种高分子量57000～66000的细胞角蛋白。CK34βEl2标记良性前列腺组织，仅在前列