光敏黄蛋白脉冲升温开折叠过程的时间分辨红外光谱研究-生物物理学专业论文.docxVIP

南开大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师指导下进行研究工作所 南开大学学位论文原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师指导下进行研究工作所 取得的研究成果。除文中已经注明引用的内容外，本学位论文的研究成果不包 含任何他人创作的、已公开发表或者没有公开发表的作品的内容。对本论文所 涉及的研究工作做出贡献的其他个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本 学位论文原创性声明的法律责任由本人承担。 学位论文作者签名： 夔基塑 2010年5月 24 日 非公开学位论文标注说明 根据南开大学有关规定，非公开学位论文须经指导教师同意、作者本人申 请和相关部门批准方能标注。未经批准的均为公开学位论文，公开学位论文本 说明为空白。 论文题目 申请密级 口限制(≤2年) 口秘密(≤10年) 口机密(≤20年) 保密期限 20 年 月 日至20 年 月 日 审批表编号 批准日期 20 年 月 日 限制★2年(最长2年，可少于2年) 秘密★10年(最长5年，可少于5年) 机密★20年(最长10年，可少于10年) 摘要摘要 摘要 摘要 蛋白质的正确折叠构型是行使其生物功能的基础，也是生命正常运转的重 要因素。我们利用脉冲升温技术快速引发蛋白质开折叠，使用时间红外光谱技 术跟踪其动力学过程，成功的揭示了在重水环境下PYP蛋白热诱导的开折叠过 程。此外，在生理条件下，盐离子会使蛋白质红外光谱复杂化，所以给研究其 折叠过程带来了巨大的困难。我们使用二级结构组份分析方法避免了蛋白质盐 效应对红外光谱的影响，成功的研究了缓冲体系中蛋白质的开折叠过程。 本论文利用变温稳态傅立叶红外(FTIR)光谱和脉冲升温时间分辨红外光 谱研究光敏黄蛋白PYP在重水及缓冲溶液中的热稳定性，对不同条件下的PYP 样品进行傅里叶变温稳态红外光谱和脉冲升温时间分辨瞬态红外光谱测量，并 通过T-jump动力学监测实验观测到在磷酸氘钾缓冲溶液条件下31℃时PYP的无 规卷曲结构转化为13折叠结构的动力学过程，结合盐效应理论简历了动力学模 型。证实了用脉冲升温时间分辨红外光谱研究蛋白质折叠过程是一种可靠手段。 该结果对于进一步研究PYP的生物学功能将有积极意义。 关键词：PYP光明黄蛋白 蛋白质折叠激光脉冲升温稳态红外光谱盐效 应红外吸收强度 AbstractAbstract Abstract Abstract Correctly folded protein is the foundation of carrying out its biological function, and also the key factor for t11e normal operation of life．By using Laser-induced temperature-jump(T-jump)technique to initial unfolding events on nanosecond timescale，and time．resolved infrared(IR)spectroscopy to probe the subsequent folding kinetics and structural ordering along the folding pathways，we investigated the thermal．induced unfolding process of PYP in D20．In addition,under physiological conditions salt ions Can complicate the infrared spectra of proteins． Here we used the method of secondary structural component analysis to avoid salt effects on the infrared spectra of proteins，and successfully studied the unfolding process of proteins in buffer． The thesis has investigated the thermal stability of Photoactive Yellow Protein(PYP)in D20 and buffer respectively by using FTIR and temperature-jump experiment．We have