甘蓝型油菜ADC基因片段的克隆及序列分析.pdfVIP

南方农业学报 J0uRNAL0FsOUTHERNAGRICuIJTURE2012，43(2)：135—140 ISSN2095—1191：CODENNNXAAB http：／／www．nfnyxb．com DOI：10．S969／j：issn．2095—1191．2012．02．135 甘蓝型油菜ADC基因片段的克隆及序列分析 洪 林1，一，闫晓红1，李 晨1，刘正富，魏文辉卜 (1中国农业科学院油料作物研究喇农业部油料作物生物学重点实验室，武汉430062；2重庆市农业科学院果树研究所，重庆402260) 摘要：【目的】克隆甘蓝型油菜精氨酸脱羧酶(ADc)基因的cDNA片段，为进一步获得ADc基因全长及研究其的生 物学功能奠定基础。【方法】以甘蓝型油菜(Brassjca瑚pusL)品种中双6号的花蕾为材料，设计简并引物，采用同源克 3 隆法扩增ADc基因的cDNA片段。【结果】成功扩增获得8个不同的ADc基因拷贝，按长度将其分为1011、999、981bp 类，8个拷贝核苷酸序列之间的同源性为81％～99％，其推导氨基酸序列之间的同源性为86％～99％。101lbp片段包含3 种不同的序列s1一s3，序列间存在9个单核苷酸多态性(sNP)位点。999bp序列包含s4和s5，具有3个sNP位点，两个区 段出现连续碱基缺失。98lbp序列包含s6～s8，发现14个sNP位点，且第67位核苷酸出现无义突变，4个区段发生碱基缺 失。序列s4～S8共同缺失第632—634、642～650位的核苷酸小片段。氨基酸同源比对和系统进化分析结果表明，8个不同 ADc基因拷贝与芥菜(Bfassfcaiu玎ceaL．)、拟南芥(Afabjdops扭曲aj括naL．)、盐芥(强ejju玎甭ejjabalo曲ilaL)等物种的 ADc基因同源性高，亲缘关系近。【结论】所获得的8个基因拷贝即为来自于甘蓝型油菜ADc基因的片段。 关键词：甘蓝型油菜；精氨酸脱羧酶(ADc)基因；同源克隆；序列分析 中图分类号：S635 文献标志码：A annand 0IofAJ一，UADC lnin 乙10nlngSeqUenCeanalySlS genetragmentS Cloningsequenceanalysis genefIragments BrassicaL． napus HONG Wen—huil+ Linl”，YAN 1，LIChenl，LIU Xiao—hong Zheng—fu扩，WEI Research ofoil ofthe of Institute，Chinese (10ilCrops AcademyofAgriculturalSciences，KeyLaboratoryCmpBiologyMinis‘ry Research 430062，China；2FIuit Sciences， Agdculture，Wuhan Institute，ChongqingAcademyofAgdcultural 402260，C