过表达Foxn1诱导人胚胎干细胞定向分化为胸腺上皮细胞的研究-动物遗传育种与繁殖专业论文.docxVIP

浙江大学硕士学位论文 浙江大学硕士学位论文 致谢 致谢 2012年拿到浙江大学动物科学学院录取通知书的兴奋似乎还没散去，转眼 三年就过去了，如今很快就要站上毕业答辩的讲台，回想在实验室的三年时间 里，我认识了很多好的老师和学生，也学到了很多东西，尽管马上就要离开这 个地方，但我想我的人生之路才刚刚开始。 感谢我的导师肖磊教授。是他带我走上了科研这条路，他严谨的科研态度， 活跃的思维方式，认真的做事原则对我有很大的影响，将会使我终身受益。在 我实验遇到困难时，他会教我如何看待问题，如何去思考并解决问题；在我处 于迷茫时，他会给我指明大方向，让我不会止步不前；在我想退缩时，他会给 我鼓励和支持。 感谢鲍磊师兄、陈海德师兄和李文玲师姐在实验上给我的帮助，谢谢你们 对我的耐心指导，使我的实验操作能力和科研能力有了很大的进步。在你们的 带领下，我才学会了独立开展实验。 感谢崔春老师和孙文采老师在实验和生活上对我的帮助，你们为实验室创 造了一个良好的环境，使我在实验室能安心顺利的做自己的实验。 感谢饶灵均师兄、任江涛师兄、陈霁君师姐、何丽夏子师姐和卢鹏飞师兄， 谢谢你们在实验设计、实验方法和论文撰写上对我的帮助和指导。 感谢跟我一起并肩作战的同学李阳、崔迪、曾晔临，大家在一起互相讨论、 互相学习、共同进步。 感谢李文静、石磊、高琳、林敏、汪进平和朱可扬等师弟师妹们，你们的 到来为实验室注入了新的血液，增添了新的活力。 感谢各位评审委员在论文评审过程中付出的心血和给予的宝贵建议。感谢 各位答辩老师在毕业答辩程序上给予的耐心指导。 最后还要感谢给予我支持与温暖的家人，感谢父母对我的养育与教导。感 谢我的丈夫陶锦元对我无条件的包容、鼓励与陪伴。谢谢你们的理解和支持。 林喜娟 2015一12—10 万方数据 浙江大学硕士学位论文 浙江大学硕士学位论文 中文摘要 过表达Foxnl诱导入胚胎于细胞定向分化为胸腺上皮细胞 的研究 摘要 自第一株人胚胎干细胞系成功建立以来，人胚胎干细胞(human embryonic stem cells，hESCs)在再生医学领域的应用前景受到越 来越多研究者的关注。hESCs是一种具有向所有细胞分化的多分化 潜能以及在体外无限扩增的自我更新能力的细胞，这些特性为细 胞治疗提供大量供体细胞带来了很大的希望。胸腺是机体重要的 中枢免疫器官，它不仅是哺乳动物T细胞发育分化和成熟的场所， 而且还可以通过消除自体反应T细胞从而形成自身免疫耐受。胸腺 机能障碍将严重影响机体免疫功能，使机体免疫自稳功能紊乱并 伴发自身免疫性疾病。胸腺移植对免疫缺陷患者的治疗具有很大 的临床意义，但是器官供体的短缺使得这一治疗方法得不到广泛 应用。通过在体外将hESCs分化为胸腺上皮细胞可以建立一个胸腺 上皮细胞的发育模型，并为细胞治疗提供大量可移植的胸腺上皮 细胞。 本课题通过在人胚胎干细胞中过表达转录因子Foxnl，观察细 胞形态变化并检测标志基因的表达，成功地将其定向分化为胸腺 上皮细胞。利用TALEN介导的同源重组在人胚胎干细胞中敲入 万方数据 浙江大学硕士学位论文 浙江大学硕士学位论文 中文摘要 Foxnl—mCherry报告元件，使其能够指示内源Foxnl的表达。通过 Tet．on诱导表达慢病毒系统在人胚胎干细胞系x．01中过表达Foxnl， 发现人胚胎干细胞逐渐分化，细胞形态变扁平，细胞体积变大，表 现出类似胸腺上皮细胞的形态。RT-PCR结果表明，过表达Foxnl 后胸腺上皮细胞的标志基因Tbxl、Hoxa3、Eyal、K5、K8和内源 Foxnl的mRNA水平都显著上调，并且随着诱导时间的延长而增加， 在第12 d达到最高。对诱导后第12 d所得的细胞进行免疫染色可观 察到飚和K8的表达，其中19％的细胞表达K5，45％的细胞表达K8。 上述结果表明，通过过表达Foxnl可诱导人胚胎干细胞定向分化为 胸腺上皮细胞。这些结果将有利于推动hESCs的临床应用，促进 hESCs在细胞治疗中的应用发展。 关键词：人胚胎干细胞；胸腺上皮细胞；转录因子；Foxnl；定向分化； Tet．Oil系统 万方数据 浙江大学硕士学位论文 浙江大学硕士学位论文 英文摘要 Study of direct differentiation of hESCs to thymic epithelial ceHs by overexpressing transcription factor FOXN 1 Sinc