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课件:医学文库网厌氧菌郑州大学第一临床学院冯羡菊.ppt
培养特性 生长迅速,代谢活跃,45℃生长最好 血琼脂平板:双层溶血环 内环完全溶血-θ毒素 外环不完全溶血-α毒素 蛋黄琼脂平板: Nagler反应 牛奶培养基:“汹涌发酵” (stormy fermentation) 双层溶血环 B Nafler反应 汹涌发酵现象 C 2019 - * 标本的检查方法 实验室收到标本应在20~30min内处理完毕,最迟不超过2h。如不能及时接种,应将标本保存于室温(冷藏对厌氧菌有害)。 直接检查:实验室收到标本应仔细观察其性状,包括气味、是否脓性、带血或黑色坏死组织、硫磺样颗粒及紫外灯下有无荧光等。 除血液外,各种标本均须直接涂片作革兰染色镜检,发现染色不均,形态奇特者常为厌氧菌的表现。 2019 - * 菌 名 革兰染色 形态及其他特征 脆弱类杆菌 G- 两端钝圆着色深,中间色浅不均匀,有空泡,长短不一,标本有琥珀味 产黑色素普雷沃菌 G- 球杆菌,可见多形性,长短不一,紫外线照射发红色荧光,标本有恶臭 具核酸杆菌 G- 菌体细长,两头尖,紫色颗粒沿菌体长轴成双排列,标本有丁酸味 坏死梭杆菌 G- 菌体细长,高度多形性,长短不一,菌体中部膨胀呈圆球形 韦荣球菌 G- 极小的革兰阴性球菌 消化链球菌 G+ 球形或卵圆形,呈链状的小球菌,易染成阴性 乳酸杆菌 G+ 细长无芽胞,有时多形性,标本有乳酸气味 痤疮丙酸杆菌 G+ 排列呈X、Y、V或栅状,标本有丙酸气味 放线菌 G+ 分枝呈棒状, X、Y、V或栅状排列,脓汁中的黄色颗粒呈琥珀酸气味 破伤风梭菌 G+ 细长鼓槌状,极端芽胞,圆形 产气荚膜梭菌 G+ 粗大杆菌,呈单或双排列,有芽胞,有荚膜 艰难梭菌 G+ 粗长杆菌,芽胞卵圆形或长方形,位于次极端 厌氧菌的初步鉴定 2019 - * 标本的分离培养 初代培养:厌氧菌的初代培养比较困难,不仅要创造无氧环境,还要选择适当的培养基。 在培养基选择上应注意: 1.尽量使用新鲜培养基,2~4h内用完; 2.使用前放入无氧环境,预还原处理24~48h; 3.也可采用预还原灭菌法制备的培养基; 4.液体培养基应煮沸10min,驱除溶解氧,并迅 速冷却,立即接种。 2019 - * 培养基的选择 根据镜检结果选择合适的培养基,常用的有非选择性和选择性培养基两种。 非选择培养基:以牛心脑浸液及布氏肉汤为基础,补充0.5%酵母浸出液,5μg/ml氯化血红素、10 μg/ml维生素K1及5%~10%的脱纤维血的强化血平板。几乎能培养出所有的厌氧菌。 2019 - * 培养基的选择 常用的选择培养基: 1.七叶苷胆汁平板(BBE) 用于脆脆弱类杆菌 2.卡那万古冻溶血平板(KVLB) 可抑制大多数兼性 厌氧菌,使产黑色素普雷沃菌早期产生黑色素 3.FS培养基 梭杆菌选择培养基 4.VS培养基 韦荣球菌选择培养基 5.CCFA培养基 艰难梭菌选择培养基 6.卵黄平板(EYA)和兔血平板 产气荚膜梭菌 2019 - * 标本的接种 初代培养应同时接种固体、液体两种培养基,且每份标本应同时接种3个平板,分别置有氧、无氧和含5~10%CO2环境培养。 为了便于在混合培养物中发现厌氧菌,一般将标本分3区划线接种于平板上,在1、2区交界处,贴一张含5μg/片的甲硝唑纸片,如纸片周围出现抑菌圈,表明有厌氧菌存在。 2019 - * 培养方法 通过物理、化学或生物学等方法,创造一种无氧的环境 常用的厌氧培养法: 1.厌氧罐法 2.气袋法 3.厌氧手套箱 4.厌氧工作站 2019 - * 结果观察 厌氧菌的初代培养生长较慢,故应在48h后才能初步观察 观察时应注意: 1.厌氧菌在对数生长期对氧非常敏感,故在 培养的48h内不应使细菌暴露于空气中 2.标本镜检阳性,但培养48h却无菌生长, 应继续培养5~7d。 2019 - * 次代培养和厌氧菌的确定 初代厌氧培养有细菌生长时,必须做耐氧试验以确定是否为厌氧菌。 方法:从每个平板上挑取4~5个不同性状的菌落,每个菌落分别接种3个平板(每个平板分4~6个区,可同时做4~6个菌落的次代培养)。分别放有氧、无氧和含5%~10%CO2环境中培养48h,如只在厌氧环境中生长的细菌,即为厌氧菌。 2019 - * 鉴定试验 形态与染色:不仅能反映各种厌氧菌的特殊形态,同时也为鉴定厌氧菌提供参考依据。 菌落性状:包括其形态、大小、色素、荧光及溶血等 快速鉴
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