细胞工程《生物技术与生活》《生物技术概论》课件 视图选择纯黑白即可使用讲义汇总.pptVIP

本 章 要 点;细胞工程基础;基本概念; ?灭菌 用物理或化学因子，使存在于物体 中的所有生活微生物，永久地丧失 其生活力，包括最耐热的细菌芽孢。 这是一种彻底的杀菌措施，通过 灭菌的物品不在存在任何有生命的有 机体。; ?无菌 即没有活的微生物存在。例如，实 验室中的无菌操作技术、食品工厂 的无菌包装、防止微生物污染的无 菌室、经过灭菌或过滤后的无菌空 气等。;基本概念;细胞工程基础;细胞工程;?胚胎培养;（胚性愈伤组织 或脱分化细胞）;植 物 细 胞 工 程;细胞的全能性; 植物细胞培养 植物细胞具有全能性。从植物的幼胚、根、茎、 叶、花和果实等不同器官的组织中分离的单个细 胞，经过特殊培养形成愈伤组织，并可进一步诱 导生成完整的植株。; 细胞的全能性 培养液中添加矿质和有 细胞分化时利用，试 管苗未形成时细胞赖 以生存的条件。 整个过程进行彻底灭菌 一些微生物的代谢生 消毒、严格无菌操作？ 长比未分化的细胞快。;植物细胞全能性的必要条件;植物组织培养过程; 植物组织培养条件 含有全部营养成分的培养基、一 定的温度、空气、无菌环境、适合的 pH、适时光照等。;胚性愈伤组织;脱分化的目的？ 脱分化和再分化 的主要因素？;植物组织培养; ? 次生代谢产物 植物在生长过程中，体内积累的一些 中间分子，通常不参与植物的基本生命过 程。如生物碱、苷类、黄酮类等。;大规模植物细胞固定化装置;固定化植物细胞技术路线;植物细胞工程;纯化后的原生质体;(1) (1);植物A细胞;植物体细胞融合;关于细胞融合;植物原生质体制备 ? 取材、除菌 ? 酶解：纤维素酶、果胶 酶、蜗牛酶等。 ? 分离：过滤、离心。 ? 洗涤：渗透压稳定剂。 ? 鉴定：荧光显微镜法。;植物原生质体融合 ? 化学诱导法：PEG、高 Ca2+、高pH。 ? 物理诱导法：微电极法。; 杂合体的鉴别与筛选 ? 显微镜鉴别法 ? 遗传互补法 ? 细胞与分子生物学鉴别法 ? 在生植株形态特征鉴别法; ? 单倍体育种 单倍体(haploid):只有一个染色体组（只含有体细 胞染色体数目一半）的细胞或者个体。 天然：如孤雌繁殖途径，植物细胞不经受精而发育 成单倍体胚，继而长成单倍体植株。 人工诱导：例如，用花药或花粉培养。单倍体植物 很小，生活力弱，完全不育（染色体不平衡）。 * 单倍体通过加倍以后可以得到纯二倍体。缩短育 种时间，保证基因纯合存在，不会发生分离。; 单倍体在植物育种上的重要性 单倍体染色体加倍可获得纯合二倍体 有利于远缘杂交新类型的培育和稳定 与诱变育种相结合可加速育种进程 可作为外源基因转化的受体系统; 花粉培养 花粉的分离 机械分离法 自然散落法 花粉的培养 浅层液体培养法 看护培养法; 单倍体培养物的加倍 染色体的人工加倍方法 ? 物理法：如温度骤变、机械损伤、电离和非电离 辐射、离心力等 。 ? 化学法：如秋水仙素、吲哚乙酸、氧化亚氮 (N20) 等处理。 应用最普遍而有效的方法是用秋水仙素处 理。; 染色体加倍 秋水仙素的作用：抑制处在分裂盛期的细胞纺锤 丝的形成，染色体的长度收缩；但不影响染色体 的纵裂。由此使细胞停顿在分裂中期，染色体虽 能复制，但不能分向两极，造成染色体数目加倍 而成多倍体。当药剂洗净后，细胞便可恢复正常 的分裂。; ? 人工种子的研制 人工种子及人为制造的种子，是一种 含有植物胚状体或芽、营养成分、激素以 及其他成分的人工胶囊。;人工种子; 模仿天然种子结构制造出来的生命有机体，能象 种子一样萌发再生，长成植物。其核心“部件”是—个 被外层物包埋的具有类似种胚功能的胚状体，在其发 育早期与不定芽相似，但具有极性，可以分化出茎端 和根端。; 作为21世纪极具发展潜力和经济价值的高科技 成果，人工种子的突出优点： ① 不受环境因素制 约，一年四季进行工厂化生产；② 胚状体是经人 工无性繁育产生，有利于保存种系的优良性状； ③ 与试管苗相比，人工种子成本更低，更适合于 机械化田间播种，并可根据需要在人工胚乳中添 加适量的营养物、激素。农药、抗生素、除草剂 等，以利胚状体的健康生长。;细胞工程;单个细胞;大量培养动物细胞方法 ? 微导管培养法 ? 微载体培养法 ? 微胶囊培养法;动物细胞培养;1?2mm2小块 培养瓶;动物细胞工程;动物细胞工程;动物细胞工程;动物细胞工程; 丧失感染活性 （不感染细胞）;融 合 过 程 示 意 图;动物细胞工程;动物细胞工程; 根据阿根廷科学家米尔斯坦和德 国科学家柯勒设计的实验方案: ? 实验目的:制备单克隆抗体。 ? 实验原理：B淋巴细胞能产生抗体，骨髓瘤细 胞能无限增殖，杂交瘤细胞既能产生抗体