细胞生物学研究方法内容资料.pptVIP

第三章 细胞生物学研究方法;放大倍数：成像大小与原物体大小比值。 分辨率（分辨力）：指分辨物体最小间隔的能力。 样品的反差情况：被观察结构与其背景对光吸收的差别程度。;分辨率——取决于光源波长λ、物镜镜口角α和介质折射率N;不同光线的波长;Magnification and resolution ;;;1. 普通光学显微镜 构成： 照明系统：可见光 光学放大系统； 光能够透过样品 放大倍数：1000-1400;样品制备;2. 活细胞观察;; ;Bright-field Microscopy; 可以观察未经染色的标本和活细胞 （显微录像技术） ;3 荧光显微镜 (1941,Coons） fluorescence microscope; 用于特定核酸序列在染色体上的定位，使DNA杂交技术和荧光染色技术的结合。 ;免疫荧光染色及荧光放大技术;多荧光染色技术;4 激光共聚焦扫描显微境 Laser confocal scanning microscope;蓝色为细胞核，绿色为微管;5 倒置显微镜;三、电子显微镜以电子束为光源。用于观察超微结构（小于0.2μm），又称亚显微结构。;scanning electron microscope, SEM;系统与SEM相似； 实际放大倍数可达几十万倍； 光源穿过样品，因此切片要求非常薄（40-50nm)。 用重金属盐染色。;光学显微镜照片×1000;三维立体图像的构建;Use of the Electron Microscope to produce a 3D image ;第二节 生物化学与分子生物学技术;一、离心技术;1 差速离心 Differential centrifugation;Low speed;2 密度离心;速度沉降;等密度沉降;Velocity (A) and Equilibrium (B) sedimentation;;层析法-分离蛋白质等生物大分子物质，根据待分离组分的形态、大小、电荷的不同进行分离方法。;聚丙烯酰胺凝胶电泳;The Fluorescent Activated Cell Sorter;二、分子杂交技术;人类染色体端粒DNA的荧光原位杂交照片;2 Southern杂交;3 菌落杂交;第三节 细胞培养;群体培养（左）和克隆培养（右） ;原代细胞 （primary culture）从有机体取出后立即培养的细胞 ，通常指1～10代体外培养细胞。 传代细胞（subculture）适应在体外培养传代的细胞。 细胞系（cell line）：可传代40～50次的传代细胞。 连续细胞系：原代培养细胞成功传代即为细胞系,可能无限制的传下去。 ;动物细胞培养过程;二、植物细胞培养; 植物细胞培养;三??细胞融合;融合方式：病毒介导，化学物质介导（PEG等),电融合等;单克隆抗体1975，Milstein Kohler