FLASH速制备色谱分离提纯的方法.pptVIP

尚华医药flash培训 睿智分析部 报告人：俞世雄 分离提纯的方法 蒸馏 重结晶 萃取 柱层析（爬板 传统的玻璃柱过柱 仪器过柱） 在这些常用的分离方法中，柱层析是最常用的，而今天我们所要讲的就是仪器过柱又称flash 快速制备色谱--flash 1978年W.C.Still等化学家提出了快速制备色谱这一概念，与传统的柱色谱相比该技术在“一闪间”就可以完成分离纯化，这就是flash一说的由来。 快速制备色谱的原理 此图为flash仪器的一个简单构造图 flash与传统柱层析的比较 省时 省力 省溶剂 紫外检测易判断目标产物 减少点板次数 flash的应用与操作 flash正相应用 flash反相应用 flash仪器操作 flash正相应用 一 TLC爬板 选择极性和溶解性都较合适的展开剂，并使目标产物的Rf值保证在0.15~0.3左右为最好 左图为某个组份点在某个Rf值出需要多少个cv（柱体积）的溶剂才能洗脱下来 一般情况下我们在实际的flash应用中应用的柱体积都会多于这个数据，以保证产物的纯度 flash正相应用 二 溶剂的选择 为了确保产物既要在TLC板上Rf处于0.15~0.3也要保证各组份分离度，因此我们在溶剂的选择上也需要尝试不同的配搭。 右表为我们在正相柱层析中常用溶剂的极性表 展开剂的极性可以根据极性强度和溶剂所占体积百分比计算得出 eg:正己烷：乙酸乙酯（1：1）=0.5*0.01+0.5*0.58=0.3 正己烷：二氯甲烷（3：7） =0.3*0.01+0.7*0.42=0.3 flash正相应用 三 flash柱的选择和上样量的关系 公司现在常用的flash正相柱为奥秘科技公司生产的柱子，其装柱的填料为普通硅胶目数为200~300目，规格有4g、12g、20g、40g、80g、120g等.根据样品的质量可选择相对应的，一般柱子最大载样量为该柱子硅胶量的1/20,即20g的柱子一般最多为1克的粗品，在实际的应用中还应根据各组份的分离程度和溶解性等来判断具体的上样量. flash正相应用 四 上样方法的选择 湿法和干法 湿法上样：一般样品的溶解性较好时可以采用湿法上样，湿法上样具有方便损失少的特点。但必须注意湿法上样的溶剂必须是淋洗剂中极性较小的溶剂或掺入百分比较少的极性溶剂，否则组份将很容易被洗脱下来。且溶剂量不宜超过柱体积的10% 干法上样：绝大多数的样品我们都采用干法上样，干法上样所要注意的是，硅胶量和规格的选择。硅胶量控制在是样品的1~2倍，硅胶规格选择上尽量和柱子的目数一样的200~300的硅胶，切记当样品比较难以拌匀拌干时请选择100~200目硅胶，主要是因为当你拌样硅胶越多时整个柱子的压力就会上去，以免出现仪器过压现象！ flash反相应用 一 反相的原理 反相填料是在硅胶基质上键合的诸如C4,C8,C18脂肪链的非极性填料。非极性或疏水性化合物被强烈保留，而极性样品被弱保留，更快的通过柱床。“反相”用来描述其色谱过程与正相色谱正好相反。 flash反相应用 二 反相色谱的流动相 常用的流动相为水和乙腈或水和甲醇，偶尔我们也会采用水和四氢呋喃。 在水相中我们一般都会滴加些弱酸弱碱，把整个体系调至偏酸偏碱，以保证组份能起峰。常用的弱酸弱碱是甲酸、三氟乙酸，氨水，碳酸氢铵等，所加的百分比一般与液质体系相同。 flash反相应用 三 反相柱的选择 公司现在用的反相柱大多是自己装填的（进口填料加国产这柱套），现成的成柱也有，为国产柱，效果上比自填柱稍差，但其有价格优势！这些都可以在在公司采购平台上可以询价订购。 一般我们经常用的反相柱规格为40g,其上样量一般在200mg左右。 flash反相应用 四 反相样品的上样 反相上样我们一般都采用液体上样，一般用水，甲醇，四氢呋喃，乙腈，DMF,DMSO等溶剂来溶解样品。选取能使样品溶解状态最好的溶剂溶解！最好是100mg样品能溶解在1ml溶剂中为佳！ 样品中的重金属和催化剂以及一些与水不互溶的正相溶剂都要处理掉，才能上反相柱子。 flash反相应用 五 梯度编辑 反相的梯度设置与正相不同，我们无法通过点板也确定，只能靠液质上的保留时间来设置来设置梯度。 液质一般采用的一个线性梯度5%至95%（流动相是水和乙腈），根据目标峰的保留时间推算出该峰起来时的乙腈含量，由于液质使用的柱子粒径一般为3um~3.5um，而反相柱所用的填料粒径是40~60um，粒径越小保留性越好，所以在反相柱上它的出峰浓度会比液质上小。 flash仪器操作 公司现有2种型号的flash 仪器 ISCO COMPANION BIO