鸡传染性支气管炎病毒HH06株单克隆抗体制备及抗原捕捉ELISA方法建立-兽医学；基础兽医学专业论文.docxVIP

㈣㈣ ㈣㈣ 0㈣ U 目录 IyIJlllIIl3IIInl吆nilUlI IIl2Ul郇IIIIIHl0IIl 目 录 摘要 ．I 英文摘要 ．III 1前言 1 1．1 IBV病原学 ．1 1．1．1 IBV基因组结构 1 1．1．2 IBV结构蛋白 2 1．2 IB流行病学 一4 1．3 IB致病机理 4 1．4 IB临床症状和病理变化 ．5 1．5 lB诊断技术 ．6 1．5．1血清学诊断方法 一6 1．5．2病毒分离 7 1．5．3电镜鉴定 一8 1．5．4免疫组织化学 一8 1．5．5分子生物学诊断 一8 1．5．6鉴别诊断 一9 1．6 IBV单克隆抗体研究进展 9 1．7研究目的和意义 l 0 2材料与方法 ．11 2．1实验材料 ．．¨ 2．1．1病毒株和质粒 11 2．1．2动物及细胞 11 2。1．3酶和主要试剂 ．1 l 2．1．4主要试剂配制 1 2 2．1．5仪器设备 l 4 2．2实验方法 ．．14 2．2．1 IBV单克隆抗体的制备 ．．14 2．2．2单克隆抗体生物学特征鉴定 ．1 7 2．2．3抗原捕捉ELISA方法建立与应用 20 2．2．4数据统计 23 3结果 24 3．1 IBV单克隆抗体的制备 24 3．1．1免疫抗原的制备 ．．．． 24 3．1．2 ELISA筛选方法的建立 24 3．1．3杂交瘤细胞的筛选 25 3．1．4腹水制备 25 万方数据 东北农业大学农学硕士学位论义3．2单克隆抗体生物学特征鉴定 东北农业大学农学硕士学位论义 3．2单克隆抗体生物学特征鉴定 25 3．2．1单克隆抗体浓度与效价测定 ．25 3．2．2单克隆抗体Western blot鉴定 一26 3．2．3单克隆抗体IFA检测 28 3．2．4杂交瘤细胞分泌单克隆抗体稳定性试验 一30 3．2．5杂交瘤细胞染色体计数 ．30 3．2．6单克隆抗体Ig亚类鉴定 31 3．2．7单克隆抗体中和活性鉴定 ．32 3．2．8单克隆抗体特异性分析 一33 3．3 IBV抗原捕捉ELISA(AC．ELISA)方法建立与应用 33 3．3．1抗原捕捉ELISA优化 33 3．3．2抗原捕捉ELISA方法特异性试验 40 3．3．3抗原捕捉ELISA方法灵敏性试验 40 3．3．4抗原捕捉ELISA方法重复性试验 40 3．3．5 M41株IBV人工感染样本的检测 ．4l 4讨{仑 42 4．1抗原的制备 42 4．2单克隆抗体的制备 42 4．3单克隆抗体生物学特性鉴定 43 4．4 AC—ELISA检测方法建立 ．44 5结论 45 致谤{ ．46 参考文献 ．47 攻读硕士学位期间发表的学术论文 55 Il 万方数据 CONTENTSCONTENT CONTENTS CONTENT S Abstract in Chinese i Abstract in English．． ． ．．．．．．．．． ．．．．．． ．．．． ．．．．．． ．．．．．．． ． ．． ．．．．．．． ．．．．．．．．．．．．．．． ．．．．．．．．．1II 1 IⅡtroductioⅡ ．1 1．1 Etiology．．．．．．．．．．．．．．．．．． ．．．．． ．．．．．．．． ．．．．．．． ．．．．．．．．．． ．．．．．． ．．．．．．． ．．， ． ．．．．．．．．．．．． ．1 1．1．1 Genome structure of IBV 1 1．1．2 Structure proteins of IBV．．．．．．．．．．．．．． ．．．．．．．． ．． ．．．．． ．．． ．．． ． ． ．． ．．． ．．．． ．2 1．2 Epidemiology．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．4 1．3 Pathogenesis．．．． ．．．．． ．． ．．． ．．．．．．． ．．．．． ．．．．．．． ．．．．． ． ．．．．．．．．．．．．．． ．．．．．． ．．．．．．． ．．．．．． ．4 1．4 Clinical symptom and pathological change．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．5 I．5 Diagnosis．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．