家蚕Sod1和丝心蛋白N端结构域的结构与功能研究-生化与分子生物学专业论文.docx

University University of Science and Technology of China A d i sse rtatio n fo r docto r’S d eg ree The structu ral and fu nctional studies of Sodl and the N— te rm i n a I of fi b ro i n frOm th e silkworm Bombyx mori Author’S Name： Nannan Zhang Major： Biochemistry and Molecular Biology Supervisor：Prof．Cong．Zhao Zhou 一一·’ Finished time： November 1钒，2010 -· L L 中国科学技术大学学位论文原创性声明本人声明所呈交的学位论文，是本人在导师指导下进行研究工作所取得的成 中国科学技术大学学位论文原创性声明 本人声明所呈交的学位论文，是本人在导师指导下进行研究工作所取得的成 果。除已特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含任何他人已经发表或撰写 过的研究成果。与我一同工作的同志对本研究所做的贡献均已在论文中作了明确 的说明。 作者签名：弓堑幽蜘 签字日期：二!!竺二!二_’沙 中国科学技术大学学位论文授权使用声明 作为申请学位的条件之一，学位论文著作权拥有者授权中国科学技术大学拥 有学位论文的部分使用权，即：学校有权按有关规定向国家有关部门或机构送交 论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅，可以将学位论文编入中国学 位论文全文数据库》等有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制 手段保存、汇编学位论文。本人提交的电子文档的内容和纸质论文的内容相一致． 保密的学位论文在解密后也遵守此规定。 崩么开 口保密(——年) 作者签名：墨垒亟蛰 导师签名： 签字日期：五!!!玺!兰旦!!臼 签字日期：≥2 Z竺二!p／1／ r—一目录 r—一 目录 目录 摘要 ．i Abstract．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．iii 第l章家蚕中超氧化物歧化酶(B所Sodl)的晶体结构与生化分析 ．．1 1．1超氧化物岐化酶研究背景与进展 ．1 1．1．1氧化应激反应 l 1．I．2超氧化物歧化酶 2 1．1．3 Sodl突变相关的肌萎性脊髓侧索硬化症 。6 1．1．4家蚕中Cu／Zn Sod背景简介 ．12 1．2实验材料和方法 13 1．2．1 BmSodl表达载体构建 13 1．2．2 BmSodl蛋白的表达和纯化 18 1．2．3 BmSodl晶体生长、数据收集及结构解析 19 1．2．4 BmSodl生化性质分析 20 1．3实验结果和讨论 2 l 1．3．1 BmSodl基因鉴定、克隆表达和基本生化性质 2l 1．3．2 Zn-BmSodl与Cu／Zn-BmSodl初步晶体学研究 。27 1．3．3 Zn-BmSodl与Cu／Zn-BmSodl晶体结构整体结构 ．．30 1．1．4 Zn-BmSodl与Cu／Zn-BmSodl的结构比较 。33 1．3。5 BmSodl的螺旋纤维结构及相互作用面 35 1．4总结 ．40 参考文献 ．．42 第2章丝心蛋白重链N端结构域的生化分析及变构效应研究．5 l 2．1蚕丝蛋白研究背景与进展 5 l 2．1．1家蚕蚕丝的组成成分 ．．54 2．1．2蚕丝的形成及影响因素 ．．57 2．1．3丝腺中丝心蛋白的结构状态 ．59 目录2．1．4蚕丝蛋白的纤维化机理 目录 2．1．4蚕丝蛋白的纤维化机理 ．60 2．1．5蚕丝蛋白在生物医学材料中的应用 62 2．1．6丝心蛋白重链氨基端结构域(FibN)研究背景 ．65 2．2实验材料和方法 67 2．2．1 FibN表达载体构建 67 2．2．2 FibN蛋白的表达和纯化 69 2．2．3 FibN晶体生长和数据收集 7l 2．2．4 FibN蛋白NMR一维氢谱分析 ．72 2．2．5圆二色光谱分析FibN蛋白的二级结构 。72 2．2．6扫描电镜与透射电镜观察FibN蛋白聚集状态 ．．73 2．2．7动态光散射分析FibN蛋白在溶液中聚集状态 。73 2．3实验结果和讨论 73 2-3．1 FibN基因鉴定、克隆表达和基本生化性质 73 2．3．2 FibN蛋白初步晶体学研究 8l 2．3．3在不同pH下FibN蛋白NMR一维氢谱分析 83 2．3．4 FibN蛋白变构效应 8