脊髓CCR2调控CX3CR1表达致大鼠骨癌痛的作用机制-麻醉学专业论文.docxVIP

中文摘要脊髓 CCR 中文摘要 脊髓 CCR2 调控 CX3CR1 表达致大鼠骨癌痛的作用机制 脊髓 CCR2 脊髓 CCR2 调控 CX3CR1 表达致大鼠骨癌痛的作用机制 英文摘要 PAGE PAGE IV PAGE PAGE V 脊髓 CCR2 调控 CX3CR1 表达致大鼠骨癌痛的作用机制 中文摘要 第一部分：鞘内注射 RS102895 缓解大鼠骨癌痛 目的 鞘内注射 CCR2 的特异性拮抗剂 RS102895 后，观测骨癌痛大鼠机械痛阈值、 脊髓背角细胞炎性因子表达和小胶质细胞增殖活性变化。 方法 将 Walker256 乳腺癌细胞注入大鼠左侧胫骨的骨髓腔内，构建骨癌痛模型。 健康雌性未交配 SD 大鼠 60 只，体重约 150~180g，随机分为 5 组（n=12）：假手术组 （I 组）、假手术+RS102895（II 组）、骨癌痛组（III 组）、骨癌痛+DMSO 组(IV 组)、 骨癌痛+RS102895 组（V 组）。术后 10~12d，鞘内连续注射 RS102895（3μg/μl）或 10%DMSO，每天一次，每次 10μl。观测大鼠基础痛阈值，以及造模后 3、6、9、10、 11、12d 各组大鼠的机械痛阈值。免疫组织化学法，检测脊髓背角小胶质细胞标识物 （ox-42）的表达来观察脊髓小胶质细胞增殖活性变化。各组另取 6 只大鼠 L4-6 脊髓 组织，采用 ELISA 法检测其炎性因子 IL1-β、IL-6 及 TNF-α的表达情况。 结果 与 I 组或 II 组相比较，骨癌痛组(III、IV、V 组)大鼠机械痛阈明显下降， 脊髓背角小胶质细胞增殖明显增高并呈激活状态，ox-42 平均光密度显著增加；IL1-β、 IL-6 及 TNF-α表达明显增多(P0.01)。与 III 组和 IV 组相比，V 组鞘内注射 RS102895 后骨癌痛大鼠的机械痛觉阈值明显地提高(P0.01)，并且脊髓小胶质细胞的活化显著 被抑制，MOD 值也明显降低，脊髓 IL1-β、IL-6 及 TNF-α的表达降低(P0.01)。 结论 鞘内注射 CCR2 特异性拮抗剂 RS102895 后可部分缓解骨癌痛大鼠的痛觉 超敏，CCR2 可能通过激活脊髓小胶质细胞并促进其释放炎性细胞因子而参与大鼠骨 癌痛。 第二部分： 鞘内注射 RS102895 对骨癌痛大鼠脊髓磷酸化 JNK 及 CX3CR1 表达的影响 目的 观察鞘内注射 CCR2 特异性拮抗剂 RS102895 后，对骨癌痛大鼠脊髓磷酸 化 JNK 及 CX3CR1 表达的影响。 方法 将健康雌性未交配 SD 大鼠 60 只，体重 150~180g，随机分为 5 组（n=12）： 假手术组（I 组）、假手术+RS102895 组（II 组）、骨癌痛组（III 组）、骨癌痛+DMSO 组(IV 组)、骨癌痛+RS102895 组（V 组）。将 Walker256 乳腺癌细胞注入大鼠左侧胫 骨的骨髓腔内，构建骨癌痛模型。术后 10~12d，鞘内连续注射 RS102895（3μg/μl） 或 10%DMSO，每天一次，每次 10μl。于术后 12d 给药后，免疫组织化学法来检测脊 髓 CX3CR1 的表达变化情况采用。Western-Blot 法测定大鼠脊髓 CX3CR1 及磷酸化 JNK 表达。 结果 与 I 组和 II 组相比，骨癌痛(III、IV、V 组)大鼠 CX3CR1 阳性细胞数和蛋 白表达量明显上调(P0.01)；磷酸化 JNK 表达增加(P0.01)。V 组大鼠鞘内注射 RS102895 后，明显减少了脊髓 CX3CR1 阳性细胞数，明显降低了 CX3CR1 和磷酸化 JNK 的表达(P0.01)。 结论 脊髓 CCR2 受体可通过调控 CX3CR1 受体的表达参与大鼠骨癌痛且这种 调控作用可能是通过 pJNK 通路介导参与的。 第三部分： 骨癌痛大鼠鞘内应用 SP600125 对脊髓背角 CX3CR1 和 MCP-1 表达的影响 目的 观察鞘内注射 JNK 抑制剂 SP600125 后，骨癌痛大鼠机械痛觉超敏及脊髓 背角 CX3CR1 和 MCP-1 的表达变化。 方法 将 Walker256 乳腺癌细胞注入大鼠左侧胫骨的骨髓腔内，构建骨癌痛模型。 健康雌性未交配 SD 大鼠 50 只，体重 150~180g，随机分为 5 组（n=10）：假手术组（I 组）、假手术+SP600125（II 组）、骨癌痛组（III 组）、骨癌痛+DMSO 组(IV 组)、骨 癌痛+SP600125 组（V 组）。术后 10~12d，鞘内连续注射 SP600125 10μg/10μl，1 次/d， PAGE VI PAGE VI PAGE VII PAGE VII