课件：第一章基因.ppt

乳糖操纵子正调控 如果E.coli在含有乳糖和葡萄糖培养基中生长，则细菌只利用葡萄糖而不利用乳糖。这一现象称为降解物抑制效应(catabolite repression)。 缺少葡萄糖时，腺苷酸环化酶将ATP转变成cAMP，cAMP与其受体蛋白CAP (cyclic AMP receptor protein)结合成复合物，这个复合物再与启动子上的CAP位点结合。这样，启动子上的进入位点方能与RNA聚合酶相结合。 相反，当有葡萄糖存在时，cAMP不能形成，CAP也就不能与启动子上的CAP位点相结合，启动子上的RNA聚合酶进入位点就不能结合RNA聚合酶。 这样，一个操纵元中的一组基因就有两道控制开关，只有两道开关同时打开时，基因才能够转录。 这样，一个操纵元中的一组基因就有两道控制开关，只有两道开关同时打开时，基因才能够转录。 乳糖启动子有两个CAP结合位点，一个是在 -70 到 -50(位点 I )，另一个是在 -50 到 -40(位点II)。 位点 I 包含一个反向重复序列，这似乎是大多数强结合位点的特征。位点II是一个很弱的结合位点，但是当cAMP—CAP复合物结合于位点I时，位点II结合cAMP-CAP复合物的能力显著提高。这也就是所谓协同效应(cooperativity)。一旦位点II被占据，RNA聚合酶就很快与 -35序列结合，然后再与-10序列结合。 遗传学方面，人们已经分离出两类使乳糖操纵元在无葡萄糖而有乳糖存在时也不能表达的突变体，一类位于编码CAP的cap(crp)基因上；另一类位于编码合成cAMP的腺苷酸环化酶 (adenylate cyclase) 基因cya上。细胞中CAP的合成是组成型的，因而也是相对稳定的。这样，具有正调控能力的cAMP—CAP复合物主要取决于cAMP的含量。腺苷酸环化酶位于细胞膜上。 第四节 基因工程 The Nobel Prize in Chemistry 1980 for his fundamental studies of the biochemistry of nucleic acids, with particular regard to recombinant-DNA for their contributions concerning the determination of base sequences in nucleic acids Paul Berg Walter Gilbert Frederick Sanger 1972年，美国斯坦福大学的P．Berg博土及其研究小组使用核酸限制性内切酶EcoRI ．在体外对猿猴病毒SV40的DNA和λ噬菌体的DNA分别酶切消化，然后再用T4DNA连接酶将两种消化片段连接起来，并获得了SV40和λ噬菌体DNA的重组杂合DNA分子。 Paul Berg Stanford University Simian virus 40 Simian Virus 40 (SV40) is a non-enveloped DNA tumour virus that enters cells by caveolar endocytosis and is delivered to the endoplasmic reticulum (ER) in intact form. Some evidence suggests that from there it transported to the cytosol before entering the nucleus through nuclear pore complexes. Replication of the virus occurs in the nucleus. We are interested in why SV40 enters the endoplasmic reticulum (ER), (i.e. whether ER entry is essential to infection and if so why), how SV40 penetrates through the membrane of the ER, and how it is transported to the nucleus. λ- phage Stanley N. Cohen , at Stanford University 1973年 将编码有卡那霉素(kanamycin)抗性基因的大肠杆菌 R6-5