基底外侧杏仁核内的蛋白降解调控线索性恐惧记忆的擦除-细胞生物学专业论文.docxVIP

CoNTENTSChinese CoNTENTS Chinese abstract ．． ． ．．． l English abstract ． ．．．．． 4 Symbol description ． ．． ．． ．．8 Introduction ．． ．．． ．．10 Materials and Methods ． ．．．． 12 Results ．．．．． ．．． ．．． ．24 Discussion ．．．．．．．． ． ．． ．3l Figures．．． ． ． ． 35 References ．．．． ． ．． ．．47 Acknowledgements ． ．． ．．．． ．．49 Achievements．．．． ． ．．． ． ．．51 万方数据 山东大学硕士学位论文基底外侧杏仁核内的蛋白降解调控线索性恐惧记忆的擦除 山东大学硕士学位论文 基底外侧杏仁核内的蛋白降解调控线索性恐惧记忆的擦除 硕士研究生：王晓彤 专 业：细胞生物学 导 师：王越副教授 中文摘要 一、研究背景 创伤后应激障碍(Post廿aumatic stress disorder，PTSD)主要是由于恐惧记忆不 能正常消退(Extinction)导致。暴露疗法是治疗PTsD的常用手段之一，其实 质就是促进恐惧记忆的消退。但是在I沁newal，Spontaneous recovery以及 Reinstatement这些特定情况下，之前的恐惧记忆又会再现，提示消退可能并不能 擦除原有的恐惧记忆，只是形成了一种新的安全记忆来抑制原有恐惧记忆的再现。 但近期Monfils等研究人员发现，在Extinction之前特定的时间窗内(10 111in ．6 h)给以记忆一次Retrieval，则Extinction之后原有恐惧记忆的R_enewal， SpomaIleous recovery以及Reinstatement就不会发生，说明原有的记忆是可以擦 除的。然而Retrieval+Extinction导致记忆擦除的机制是什么，目前仍说法不一。 很多研究表明记忆的形成依赖于特定蛋白的合成。那么记忆的擦除很有可能 需要降解储存记忆的蛋白。而Lee等的研究发现环境恐惧记忆Retrieval之后， 海马CAl脑区突触部位蛋白的泛素化水平增加，提示泛素蛋白酶体系统 (Ubiquitin—proteasome system，uPS)依赖的蛋白降解在记忆Retrieval之后的不稳 定阶段发挥重要作用。因此，我们推测Retrieval+Extinction关联导致的记忆擦 除与蛋白降解相关。 为了验证该假设，我们采用GST_S5a pun down多泛素化分析，蛋白酶体活 性检测，病毒构建等方法研究了以声音为线索的条件性恐惧记忆(Auditory fear conditioning，AFC)擦除过程中基底外侧杏仁核(Bas01ateral锄ygdala，BLA) 中的蛋白降解在记忆擦除中的作用以及可能的分子机制。 万方数据 山东大学硕士学位论文二、研究目的 山东大学硕士学位论文 二、研究目的 研究Retrieval+Extinction诱导的记忆擦除过程中，蛋白降解的作用以及其 分子机制。 三、实验结果 1．Retrieval+Extinction后基底外侧杏仁核内蛋白的泛素化水平以及蛋白酶体 活性增加 我们通过GST-S5a pull doWn多泛素化分析，以及体外蛋白酶体活性检测等 手段，发现在基底外侧杏仁核突触部位，Retrieval+Extinction组泛素化条带的 灰度值以及蛋白酶体的荧光强度值较单纯Extinction组都显著增加(P0．01)。 2．BLA中的蛋白降解参与调控Retrieval+Extinction后AFC记忆的擦除 我们使用蛋白酶体抑制剂BLac，经Retrieval+Extinction后，在测试Renewal， Spontalleous recover，Reinstatement时，动物的Freezing值较溶剂对照组明显增加 (PO．01)。接下来，我们又使用蛋白酶体激动剂0leumpein，再给予单独 Extinction，结果发现在Renewal，Spontalleous recover，Reinstatement时，大鼠 Freezing值较溶剂对照组显著降低(P0．01)。 3．促进蛋白降解是Extincti佃之后记忆擦除的必要条件 我