几种药物与药物载体生物功能的研究-细胞生物学专业论文.docx

University University of Science and Technology of China A d issertation for doctor’S deg ree Biolog ical fu nction of several ki n d s of d ru g a n d d ru g ca rri e r a eIP-4 中国科学技术大学学位论文原创性声明本人声明所呈交的学位论文，是本人在导师指导下进行研究工作所取得的成 中国科学技术大学学位论文原创性声明 本人声明所呈交的学位论文，是本人在导师指导下进行研究工作所取得的成 果。除已特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含任何他人已经发表或撰写 过的研究成果。与我一同工作的同志对本研究所做的贡献均已在论文中作了明确 的说明。 作者签名：—2雄 中国科学技术大学学位论文授权使用声明 作为申请学位的条件之一，学位论文著作权拥有者授权中国科学技术大学拥 有学位论文的部分使用权，即：学校有权按有关规定向国家有关部门或机构送交 论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅，可以将学位论文编入《中国学 位论文全文数据库》等有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制 手段保存、汇编学位论文。本人提交的电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。 保密的学位论文在解密后也遵守此规定。 签字日期： 兰 签字日期： 作者签名： 导师签名： 摘要摘要 摘要 摘要 传统的药物或给药方式缺乏选择性，药物体内分布广泛，治疗剂量下对正常 组织器官毒副作用大，给患者带来极大痛苦且疗效欠佳。近年来，药物靶向或药 物载体的研究成为众多学者的研究热点。提高药效和降低药物的毒性是现在药物 研究者的主要目标。我们针对这方面的需求做了以下两方面的工作。i)针对脑 部疾病治疗困难的情况，利用噬菌体展示的方法筛选一条由鼻腔到脑的短肽，希 望能作为脑部疾病药物的导向肽提高药物的药效，减轻病人的痛苦。ii)针对抗 肿瘤药物疗效差、副作用大的缺点，我们发现小分子药物半胱胺能通过细胞自噬 增加化疗药物阿霉素的疗效。下面分别概括一下这两方面工作取得的主要成果。 第一部分：我们利用噬菌体展示技术，由鼻腔给药筛选到了一条能到达脑部 的特异性短肽。噬菌体展示文库通过鼻腔给药，在大鼠体内经过三轮筛选后得到 能在脑部特异性富集的噬菌体库，并在其中挑取出10个单克隆噬菌体。这10个 单克隆噬菌体经鼻腔给药后，在脑中收集到的7号克隆(Clone．7)最多，是随 机噬菌体的50倍，我们根据10个单克隆的DNA序列，合成了Clone．7噬菌体 表面表达的短肽NB．7(ACTTPHAWLCG)进行了后续的研究。通过脑中噬菌体 回收和组织免疫荧光的方法都证实Clone．7噬菌体能特异的在脑部富集，而在肝 脏、脾脏及血液中回收到的Clone．7噬菌体量都很少。另外，我们发现Clone．7 噬菌体和NB．7短肽都是通过嗅神经通路进入大鼠大脑的。特异地导向脑部的“引 导肽’’—-NB．7将可能成为潜在的药物载体。 第二部分：半胱胺通过调节细胞自噬促进化疗药物阿霉素对肿瘤细胞的杀 伤。之前的研究表明半胱胺处理的星形胶质细胞内会有很多类似于自噬泡的“包 涵小体”。我们在各种癌细胞中通过实验证明半胱胺能引起自噬泡的聚集，并且 半胱胺诱导的自噬分为前期和后期两个不同的阶段。半胱胺处理的细胞前期自噬 泡的合成被激活，后期自噬泡的降解被抑制。在宫颈癌细胞、黑色素瘤细胞、阿 霉素抗性的乳腺癌细胞、小鼠黑色素瘤模型中，半胱胺都能促进癌细胞／月中瘤对 阿霉素的敏感性，并且这种促敏作用跟细胞内自噬的水平有一定的相关性。半胱 胺作为促进癌细胞对阿霉素敏感性的“增敏剂可能将被临床用来作为抗癌药的 辅助药物。 关键词：药物载体，噬菌体展示技术，嗅神经通路，半胱胺，化疗药物，细胞自 噬 ABSTRACT ABSTRACT ABSTRACT r韶‰i≈ The traditional drug or drug delivery lacks of selectivity and targeting，which cause great toxic effect to normal tissue organ and bring pain to patients．Recently, study of drug targeting or drug carrier has become a research hotspot．Improving drug efficacy and decreasing drug toxicity are main goals of drug research．We focused on this field and made achiev