连续监测法正向反应-检验科.PDF

维普资讯 医学检验杂志弟7卷第2期1992年6月 69 ⑨ ^ 一 ．7弓 (【L【清乳酸脱氢酶正向连续监测的实验探讨 坐 型唆 墅 R砗年l，、f ． (南通医学院附属医院 检验科 中心实验室 。儿科 ) 摘 要 使厍I国产仪器和试剂，一步法连续监漫l血【清LD活力。NAD 和L一乳酸锂的Km分 别为2．17×10 Ill1~1or／L和l01．O1×10一mmol／L，NADH的克分子消光系数为6250，底物 NAD 和L一乳酸锂的终浓度分剐为4．~orilmol／L和138．97mmol~L，反应速度丙最大反应 速度的89％，零蛆反应时间为6min，AA／min在0．3以内具有 良好的线性关系。同时，对连 续监测的最适pH和标本的保存时间进行T实验探讨。100例健康献血员正常参考 值 为179± 36．25u／L(譬±S)，与文献值相近，与TraCe试剂盒时比，两者显著相关(r=0．9792)。本 关耋键：词易乳酸脱氢酶’连篡续监测法临鲁正蒿向反应矾瞳工舛，1v,yr-七学7 壹‘岂 乳酸脱 氢酶 (Laetate dehdrOge一Ⅱa 1．1．5 UV一754紫外可见分 光 光 度 计； sc，LD；EC；1．1．127)广泛存在于 人 体 7521型恒温染色皿架 (上海第三 分 析 仪 器 各组织器官，在辅酶 I的递 氢 作 用 下，参 厂 )。 与乳酸脱氢生成丙酮酸和还原辅酶1(NAD 1．1．6 501型超级恒韫水浴器 (上海实验仪 H)的反应，是碳水化合物进行光氧糖酵解 器总厂 )。 的最终反应，其活力的改变具有重要的临床 1．2 方 法 取基质应用液 1．0ml，加 至 意义，是临床化学中最常测定的酶之一。本 10ram光径的石英比色皿，预温至37℃，加 文根据 LD催化的正向反应，连续监 测 其活 入血清 0．05ml，立即混匀，渡长 3~0nm 。 性，效果满意，报告如下。 以空气调零，延滞时间30s，每隔lmin自动 I 材料和方法 记录吸光度一次，共洲 3次。整个操作均处 1．1 试 剂和仪器 。7℃恒温比色糟内进行。计算出△A／mia在 1．1．1 lmol／L三羟甲基氨基 甲烷(Tris)； 按公式计算： 称取TriS121．30g，溶解于800ml蒸馏水中， LD(u／L)= Ⅷ × 后加至lL 1．1．2 L一乳酸锂基质缓冲 液；称 取 L一乳 = △A／miI1×3360 酸锂 (上海试剂三厂 )1．4t)00g，蒸馏 水 约 单位定义：在37℃，pH8．8，10ram光 0ml，溶解 后 加入 lm~l／LTriS 10ml， 径的条件下，每升血清每分钟催化反应生成 用lmol／L盐酸校正pH至8．8， 加 水 至100 1~nol／LNADH的酶量为一个围际单位。 m1，少量氯仿防腐 。 2 实验和结果 1．1．3 辅酶 IJ称取氧化型辅 酶 I(NA 2．1 克分子消光系数的测定 准确配制0．1 D ，上海酵母厂 )60mg置于洁净干燥的小 Illmol／L的NADH溶液，在340am波长， 瓶，可一次称取若干瓶，簧冰箱千燥保存备 i0mm光径，37℃条件下，测定其吸光度为 H1。蛐 AD 含艟 ：足100 按 比例折算。 0．625，换算为克分予消光系数为6250。 1．]．4 基质