几种非离子表面活性剂对P-糖蛋白功能的影响考察-药剂学专业论文.docx

——一．兰竺!三!!兰兰型兰呈：!三!兰竺竺竺!!!几种非离子表面活性剂对P．糖蛋白功能的影响考察 ——一．兰竺!三!!兰兰型兰呈：!三!兰竺竺竺!!! 几种非离子表面活性剂对P．糖蛋白功能的影响考察 摘 要 研究生：林玉莲 导师：蒋学华。山本昌 随着p-糖蛋白(P·glyeoprotein，‘‘P．gP”)研究的开展和深入，其功能活性以 及抑制剂研究成为了国际生物药剂学领域研究的热点，研究方法的建立和改进 势在必行。通过P-gp功能调控，对药物吸收与处置过程进行有目的的影响，以 提高药物临床应用的有效性与安全性，成为生物药剂学与药动学研究的重要任 务。本项目的目的是建立P-gp功能调控的研究平台、并用于P．gp抑制剂初步 筛选。 P一印功能研究常采用药物吸收的研究模型进行，主要方法可以归结为体内 和体外两大类。体外方法最常用的有扩散池法、单层细胞模型法、翻转肠囊法 以及单向灌流法。体内方法主要应用的有in situ和invivo的方法。 扩散池法又分为垂直型和水平型，以及在此二者基础上发展起来的 SnapwellTM培养细胞扩散池和微型标准电极型扩散池等。扩散池法操作简单， 对于体外筛选P．gp抑制剂，以及研究底物在组织或细胞中的转运行为，研究生 理学等方面具有重要意义。尤其为肠段的分段定位研究提供了有效的手段。 翻转肠囊法可以用于研究药物在不同肠段的转运行为；还可用于预测小肠 上皮细胞的首过代谢作用。为药物的吸收提供了较大的转运面积以及，药物与 辅料在振荡器的作用下能够更好的混合均匀，方法已被证明是用于评价P．gP在 药物吸收中的作用的一个有效研究工具。 细胞模型法常用的有Caeo．2细胞膜型，MDCK细胞膜型与LS．180V细胞 模型等。 Caco．2细胞模型已经成为一种研究药物透膜吸收的重要手段，被广泛应用 于P．gP抑制剂的筛选以及作用机制的研究，然而，也有很多研究表明其作用的 几种非’r子毫■r活性翻甘P一●●}白动能的量}响J’橐局限性。作为一个静止的模型，Caco一2细胞的作用与体内的实际吸收情形有一 几种非’r子毫■r活性翻甘P一●●}白动能的量}响J’橐 局限性。作为一个静止的模型，Caco一2细胞的作用与体内的实际吸收情形有一 定的差异。并且存在很多生理条件下不存在的影响因素，如胆固醇和胆汁对细 胞转运的影响等。Caco-2细胞的P．gP表达水平有赖于培养条件，变异性较大。 此外，还有Caco-2细胞过度表达P．gP，甚至高于人类结肠表达水平的报道。 因此，体内外数据的相关性较差。除此之外，细胞培养时间较长f约2—3周1，不 能区分P—gP和其他药物泵出系统如MRP的区别。 MDCK细胞由S．H．Madin于1958年9月建成，来源于考克斯班尼犬l肾脏， 初代培养细胞类似成纤维细胞，表达犬的P．即。被转染人类mdrI基因后，能 够高度表达人类的P-gp，近年来被广泛应用于P-印底物活性、P—gp抑制剂筛 选、细胞生长调控以及肾脏远端小管细胞药物的渗透行为研究中。 LSVl80V细胞模型，同Caco一2细胞模型相似，来源于人类结肠腺癌组织， 能够高度表达P．gp。可以用于药物对P-gp活性功能的影响，包括药物在小肠 内的吸收变化以及生物利用度的研究。 单向灌流法可用于研究P—gp在小肠的功能活性，以及抑制剂对功能活性的 影响。 体内的实验方法主要有Invivo和in situ等。In situ的方法可以进行肠道的 定位研究，也可用于研究整个小肠的药物吸收行为，由于是在体的实验，和体 外方法相比较，更好的模拟了正常的生理条件。In vivo一般采用口服给药的 方式，因此，对动物的伤害基本上降至最低。 研究工作首先以扩散池法考察了经典的P．gP抑制剂维拉帕米(C=20mmol·l。) 对若丹明123转运的影响，结果显示，维拉帕米能够显著提高若丹明 123(Rhodaminel23)的吸收，并且明显抑制若丹明123分泌方向的转运，表明了 扩散池作为实验研究手段的可行性。 利用建立的扩散池方法，对Transutol P作为P．gP抑制剂进行考察，在考察 的一系列浓度(O．05％-20％)中，Transutol P在回肠对若丹明123无论是在吸收方 向，还是在分泌方向上均无显著影响。 利用建立的扩散池方法，对Gelucire 44／14作为P-gP抑制剂进行考察，在考 察的所有的浓度(O．01％．10％)下，在回肠中，浓度为0．01％时，对若丹明123的 转运没有显著影响。其他考察浓度的Gelucire 44／14对若丹明123分泌方向的转 运都有显著的抑制作用。吸收方向上，浓度为O．05％和O．1％时，对若丹明123 2 几种I鼻■p’l冒活性剩对P一-●}白磅l的影响专泰的转运没有影响，浓度为1％和10％时显著