加压毛细管电色谱-质谱联用平台的搭建与应用及细胞代谢组学研究-药物分析专业论文.docxVIP

上海交通大学硕士学位论文 上海交通大学硕士学位论文 万方数据 万方数据 第一章介绍了选题的背景和意义，对加压毛细管电色谱、肺癌、 代谢组学分别进行了综述。重点阐述了代谢组学研究在疾病分型和标 志物研究，尤其是对肺癌早期筛查的重要意义。 第二章对 pCEC-MS 的接口进行设计并对其性能进了系统考察。对 比了不同接口方式对分离和检测的影响，并首次实现了采用无补流型 接口实现 pCEC 与 MS 联用。考察了流速、流动相中盐离子、毛细管两 端电压对样品分离分析的影响，同时对联用系统的检测限和重现性进 行考察。实验证明，所搭建的 pCEC- MS 联用系统操作简便，信号稳定， 灵敏度高，样品检测限达 ng/mL 级。 第三章应用自行搭建的 pCEC-MS 系统进行代谢组学分析。采用柱 上富集技术，有效提高了样品的信号响应强度。同时，对 pCEC 流动相 中有机相组成、酸改性剂浓度、操作电压、洗脱梯度进行优化，并对 所建立的 pCEC-MS 对尿的分析方法进行验证。将肺癌病人与正常人尿 样分别进样分析，采用 PCA 和 OPLS-DA 模型对其进行统计分析，得到 候选差异物 49 个。与正常人对照组相比，肺癌病人在肉毒碱、尿酸和 氨基酸代谢通路上发生不同程度的紊乱。 第四章研究了基于高效液相色谱（HPLC）和质谱联用技术的肺癌 细胞代谢组学分析。提出了一种同时提取细胞极性与非极性代谢产物 的方法，并采用 HPLC-MS 技术对 7 种人肺癌细胞和人正常胚肺成纤维 细胞进行分析，通过多元统计分析手段获得和鉴定出 10 种极性代谢差 V 异物与 21 种非极性代谢差异物。与正常细胞相比，肺癌细胞在蛋白质 代谢、脂肪酸代谢、磷脂代谢发生不同程度的紊乱。 第五章对全文进行总结与展望。所搭建的 pCEC-MS 联用平台能很 好的完成对复杂生物样品体系的分离分析，适合于代谢组学的研究。 研究中所建立的细胞代谢组学研究方法能与传统代谢组学研究相互佐 证与补充，为研究癌症疾病机制，筛查或治疗提供了一种新的有效平 台。 关键词：加压毛细管电色谱、质谱、肺癌、细胞、代谢组学 VI COUPLING PRESSURIZED CAPILLARY ELECTROCHROMATOGRAPHY WITH MASS SPECTROMETRY AND CELL METABONOMICS STUDY ABSTRACT With the advent of the post-genome era, systems biology including metabolomics, proteomics, and lipidomics has become an international focusing hotspot in bio-research. The reduction of sample amount and the increase of sample complexity lead to a growing desire to develop miniaturized analytical instruments with superior performance in separation efficiency, resolution, peak capacity and speed. Pressurized capillary electrochromatography (pCEC) is a micro scale separation technology which has its retention mechanism based on both chromatography and electrophoresis. Mass spectrometry (MS) is a widely used detector which offers good selectivity and sensitivity. The development of new ion source such as electrospray ionization (ESI) makes it possible for the online coupling of MS with a variety of separation techniques. In this study, pCEC was coupled with electrospray ionization quadruple time-of-flight MS for the first time using a zero dead volume VII union interface. The effect