磷脂酶D催化合成磷脂酰丝氨酸的工艺研究.docxVIP

磷脂酶 D 催化合成磷脂酰丝氨酸的工艺研究杨伟东（宝鸡文理学 磷脂酶 D 催化合成磷脂酰丝氨酸的工艺研究 杨伟东 （宝鸡文理学院，陕西宝鸡 721013） 摘要：本文研究了磷脂酶 D 催化合成磷脂酰丝氨酸的工艺，实验结果表明有机相和水相比例、磷脂酰胆碱（PC）浓度、反应温 度、水相 pH 以及反应时间都对磷脂酰丝氨酸的制备有一定的影响。通过正交实验优化利用磷脂酶 D 催化合成磷脂酰丝氨酸的最佳工 艺为：有机相和水相的比例为 4/4、PC 浓度为 75 mg/mL、反应温度为 40 ℃、水相 pH 值为 4.0、反应时间为 12 h，在此工艺条件下 磷脂酰丝氨酸得率为：68.9%。 关键词：磷脂酶 D；磷脂酰丝氨酸；制备 文章篇号：1673-9078(2010)9-994-996 Synthesis of Phosphatidylserine Catalyzed by Phospholipases D YANG Wei-dong (Baoji University of Sciences and Arts, Baoji 721013, China) Abstract: The synthesis conditions of phosphatidylserine were studied using phospholipases D as biocatalyst. Results showed that the reaction time, the pH of water phase, the phosphatidylcholine concentration, the temperature of reaction and the ratio of organic phase to water phase had influence on the reaction. The orthogonal test showed that the best organic solvent-water ratio, phosphatidylcholine concentration, reaction temperature and time were 4/4, 75 mg/mL, 70 ℃, and 12 h, respectively, under which the yield of phosphatidylserine amount was 68.9%. Key words: phospholipases D; phosphatidylserine; preparation 磷脂酰丝氨酸(phosphatidylserine，简称 PS)是一 种唯一能够调控细胞膜关键蛋白功能的磷脂，对许多 细胞代谢过程有重要的调节作用，其主要功能是可提 高脑细胞活力，对治疗脑萎缩、预防老年痴呆症，改 善老年人的大脑功能有很好的疗效[1]；同时修复大脑 损伤、治疗儿童多动症具有非常显著的作用[2]；另外 可以促进脑疲劳的恢复、平衡情绪、缓解抑郁也有一 定的疗效[3~4]。磷脂酰丝氨酸的制备方法比较多，其中 主要以提取法和酶转化法为主，其中提取法主要是从 植物细胞、动物的卵磷脂中提取 PS，从动物中提取主 要是动物的大脑及内脏[5~6]；酶转化法主要是以天然的 卵磷脂为基质，加入丝氨酸，在磷脂酶 D 的作用下， 生成磷脂酰丝氨酸[7]。近年来，由于疯牛病的等动物 疾病的原因，利用动物细胞提取 PS 的方法，其提取 的产品的安全性收到人们的怀疑，现在已处于淘汰边 缘，而酶法合成条件温和，生产成本低，制备量大是 生产磷脂酰丝氨酸的最理想的方法，本文以大豆磷脂 为原料，研究了不同因素对磷脂酶 D 催化合成磷脂酰 丝氨酸的影响，确定了最佳的生产工艺。 1 材料和方法 1.1 实验材料 磷脂酶 D，自制；丙酮、正己烷、乙醇、CaCl2 等均为分析纯；大豆磷脂（PC 含量为 50%），市售。 1.2 实验方法 1.2.1 磷脂酰丝氨酸的制备工艺流程 将一定量的大豆磷脂（PC）溶解于有机溶剂中， 然后将酶及丝氨酸溶解到一定量的水相中，分别预热 一段时间后将有机相和水相混合，一定条件下在两相 界面发生反应，反应后通过对有机相的分离提取，得 到磷脂酰丝氨酸。 1.2.2 磷脂酰丝氨酸的检测方法（TLC 法） 采用 GF254 型硅胶与 5% CMC 溶液按 1:3 (g/mL) 的比例制作薄层板，然后采用氯仿:甲醇:水:浓氨水 =120:75:6:2 (V/V)展开后，放入碘缸进行染色，用薄层 扫描仪扫描后计算含量。 1.2.3 单因素实验 按照磷脂酰丝氨酸的的制备方法，以磷脂酰丝氨 酸得率为考察指标，首先在底物(PC) 浓度为 75 mg/mL、水