基底硬度对肝细胞和肝癌细胞迁移行为影响的比较研究细胞生物学专业论文.docxVIP

重庆大学硕士学位论文目录 重庆大学硕士学位论文 目 录 PAGE PAGE IV 目 录 中文摘要I 英文摘要 II 英文缩写词表 V 1 绪 论 1 1.1 国内外研究现状 1 1.1.1 肿瘤细胞迁移模式 1 1.1.2 肿瘤细胞迁移模式转换的调控因素 4 1.1.3 肿瘤细胞迁移模式转换调控的可能机制及信号途径 6 1.2 细胞行为对基底硬度的依赖 7 1.2.1 基底硬度对细胞形态的影响 7 1.2.2 基底硬度对细胞迁移、定位的影响 8 1.2.3 基底硬度调控细胞生物学行为的可能机制 8 1.3 问题的提出及验证性实验设计 10 1.3.1 问题的提出 10 1.3.2 验证性实验设计 11 1.4 研究意义 11 1.5 技术路线 12 2 硬度可控体外培养模型的建立 14 2.1 引言 14 2.2 实验试剂和仪器设备 14 2.2.1 实验仪器设备 14 2.2.2 实验材料 14 2.2.3 主要试剂的配制 14 2.3 实验方法 15 2.3.1 聚丙烯酰胺凝胶的制备 15 2.3.2 聚丙烯酰胺凝胶剪切模量的测定 15 2.4 实验结果 15 2.4.1 子力显微镜对膜表面特性的检测 15 2.4.2 不同硬度水凝胶基底膜剪切模量(G’)的测定 16 2.5 讨论 17 3 基底硬度对肝细胞和肝癌细胞迁移特征的影响 18 3.1 引言 18 3.2 实验材料、试剂和仪器设备 19 3.2.1 实验仪器与设备 19 3.2.2 实验材料 19 3.2.3 主要试剂的配制 20 3.3 实验方法 20 3.3.1 细胞培养 20 3.3.2 细胞形态观察 20 3.3.3 细胞运动能力分析 20 3.3.4 细胞骨架的激光共聚焦检测 21 3.3.5 流式细胞仪 21 3.3.6 明胶酶谱 21 3.3.7 胶原侵袭实验 22 3.3.8 细胞杨氏模量测量 23 3.3.9 统计分析 23 3.4 实验结果及分析 23 3.4.1 不同硬度水凝胶基底膜上细胞形态特征观测 23 3.4.2 不同硬度水凝胶基底膜上细胞运动能力分析 26 3.4.3 基底硬度对细胞转向角和方向持续性的影响 30 3.4.4 基底硬度对细胞整合素表达的影响 31 3.4.5 MMPs 对细胞运动能力的影响 32 3.4.6 MMPs 表达分析 35 3.4.7 不同胶原硬度对细胞侵袭的影响 36 3.4.8 细胞杨氏模量的测定 39 3.4.9 MMPs 抑制剂对细胞 MLCP 的影响 41 3.5 讨论 40 4 结论及展望 43 4.1 主要研究工作及结论 43 4.2 后续研究工作与展望 43 致 谢 45 参考文献 48 附 录 52 A. 发表论文情况 52 B. 参加科研项目情况 52 重庆大学硕士学位论文英文缩写词表 重庆大学硕士学位论文 英文缩写词表 英文缩写词表 （Abbreviation） 英文缩写 英文全称 中文全称 ECM Extracellular Matrix 细胞外基质 MMPs Matrix Metalloproteinases 基质金属蛋白酶 MLC Myosin Light Chain 肌球蛋白轻链 ROCK Rho associated Coiled-coil forming Kinase Rho-激酶 MLCP Myosin Light Chain Phosphatase 肌球蛋白轻链磷酸酯酶 MAT Mesenchymal-amoeboid Transition 间充质-阿米巴式迁移转换 MT-MMP Membrane-type Matrix Metalloproteases 跨膜基质金属蛋白酶 AMT Amoeboid-mesenchymal Transition 阿米巴-间充质式迁移转换 GEFs Guanosine nucleotide Exchange Factors 鸟苷酸交换因子 MLCK Myosin Light Chain Kinase 肌球蛋白轻链激酶 PIP2 Phosphatidylinositol Bisphosphate 4, 5-二磷酸磷脂酰肌醇 PDMS Polydimethylsiloxane 聚二甲基硅氧烷 IF Immunofluorescence 免疫荧光 FN Fibronectin 纤维连接蛋白 PBS Phosphate Buffered Saline 磷酸盐缓冲液 PAG Polyacrylamide Gel 聚丙烯酰胺凝胶 AFM Atomic Force Microscopy 原子力显微镜 FCS Fetal Ca