基底膜质胶携带人脂肪间充质干细胞移植改善心肌梗死大鼠心脏功能-细胞生物学专业论文.docxVIP

山东人学硕士学位论文目录 山东人学硕士学位论文 目录 摘要 l 2 主要英文缩略词索弓1．．． ．—一。一 。。 ——。。。 “4 前言 。 。． —— 一 6 第一部分分离、培养人脂肪间充质干细胞的实验研究 lO 材料与仪器设备 lO 1．实验材料 ．10 2．主要试剂 1 1 3．主要溶液配制 1 I 4．主要仪器 12 实验方法 13 1．人脂肪间充质干细胞的培养 13 1．1 ADMSCs的原代培养 13 1．2传代培养 ．13 2．MTT法绘制细胞生长曲线 ．14 3．ADMSCs的分裂指数测定 ．14 4．统计学处理 一14 结果1．ADMSCs的形态学观察．．．．．。．．．．．。．．．．。 ．。．．一 ．。．1414 2．ADMSCs生长曲线分析 ．15 3．ADMSCs分裂指数曲线分析 16 讨论 17 第二部分大鼠心肌梗死动物模型的建立与评价 18 材料与仪器设备 18 1．实验材料 18 2．主要试剂 。18 3．主要仪器 ．．18 实验方法 18 1．实验动物分组 ．．18 2．大鼠心梗模型的制备 19 2．1麻醉及气管插管 19 2．2结扎左冠状动脉前降支 ．．19 2．3关胸及术后观察 19 3．心脏功能的检测 20 3．1心脏超声检测 ．20 3．2血流动力学检测 20 4．心梗模型的鉴定 ．．20 山东人学硕上学化论文4．1大体观察 山东人学硕上学化论文 4．1大体观察 20 4．2组织学鉴定 ．2l 5．统计学处理 2l 结月毛 ．．。 ． ． 2Ir 1．动物存活情况 2l 2．心梗模型制备术中的情况观察 22 3．术后4周与正常大鼠心功能、血流动力学比较 22 4．心梗模型鉴定 23 讨论 。—。 ．． 。 ． ．．24 第三部分Matrigel联合人脂肪闻充质干细胞移植对心肌梗死大鼠心功能保护作用 。 ．．27 实验材料与仪器设备 ．” 1．实验材料 27 1．1冻存的脂肪间充质干细胞 27 1．2 SD大鼠 ．27 实验方法4．主要仪器 —。 ～2928 2．主要试剂 ．．27 3．主要溶液配制 28 1．脂肪间充质干细胞的复苏 29 2．大鼠心肌梗死模型制备 29 3．心肌梗死模型细胞移植 29 4．心脏超声检查 30 结月巳6．统计学处理．．．一 。．．一．．．．．．．．．．．．．．．。．．．．．一 ．一 ．．30。30 5．免疫组织化学染色和血管计数 30 1．冻存的P3脂肪间充质干细胞的复苏 ．．． 30 2．动物存活情况 3 l 3．移植4周后心脏超声检测 3l 讨论4．移植4周后的微血管密度。。 ．．：b32 总结与创新点 3S 参考文献 36 致谢 42 在读期问发表文章 42 山东人学硕士学化论文基底膜基质胶携带人脂肪间充质干细胞移植改善心肌梗死大鼠 山东人学硕士学化论文 基底膜基质胶携带人脂肪间充质干细胞移植改善心肌梗死大鼠 心脏功能 摘要 心脏足体内再生能力最低的器官之一，因此，心肌损伤到梗塞形成或其他疾 病通常会导致心脏衰竭[i-4l。干细胞为修复损伤的器官如心脏及其组成部分提供 可能，而且已经有相当多的基于干细胞策略修复心肌的研究。由人脂肪组织米源 问充质十细胞(adipose．derived mesenchymal stem cells，ADMSCs)分化l『I』来的心 肌细胞能为修复梗寨心脏提供大量潜在的细胞。然而，这～方法却被ADMSCs 向心肌细胞的无效分化、制备的心肌细胞纯度不足及移植后心肌细胞低成活牢所 限制。 细胞外基质(extracellular matrixc，ECM)是细胞赖以生存的微环境，是组织 和器官的重要组成部分，在牛物牛长发育过程中有重要的结构和牛物学作用。基 底膜基质胶(basement membrane matrix，matrigel)是一种从EHS(engeibreth holm swarm)小鼠肉痛巾提取的细胞外基质复合物，其内含有层连蛋白、l型胶原、类 肝素、蛋白多糖、生长冈子、基质金属蛋白酶等多种物质，可在细胞增殖、分化、 迁移等过程中起重要作用[S．6l。本研究应用matrigei携带人ADMSCs在大鼠心肌 梗死部位注射，观察其对细胞存活的影响及改善大鼠心梗模型心脏功能的能力。 本研究在无菌条件下分离、培养、扩增人ADMSCs。应用左冠状动脉前降支 结扎法建立大鼠急性心肌梗夕匕模型，将大鼠急性心肌梗夕匕模型随机分为4组，对 照组(PBS组)、Matrigel组、PBS+ADMSCs组、Matrigel+ADMSCs组，对移植4 周后心梗局部新生血管的密度进行测量，并利用心脏超声检测人鼠心脏功能。结 果显示，与其他各组相比，Matrigel+ADMSCs组心肌梗死区