基因配型技术和淋巴细胞毒交叉实验在改善免疫性血小板输注无效中的联合应用-免疫学专业论文.docxVIP

中文摘要 中文摘要 基因配型技术和淋巴细胞毒交叉实验 在改善免疫性血小板输注无效中的联合应用 摘要 研究背景及目的:在成份输血中，血小板是用量最多、 应用最广的一种血液成份，但对于长期采用血小板输注支 持疗法的患者来说，随机供者血小板输注无效 (Platelet transfusion refractoriness.. PTR) 是其临床治疗中遇到的主 要问题， PTR 可导致血小板减少病人的致命性出血。人类 白细胞抗原 (hUluan leukocyte antigens，HLA) 和人类血小 板抗原(human platelet al1oantigens ，旧 )的免疫是引起免 疫性 PTR 的主要因素。从理论上讲，成份输血应该遵守器 官移植的原则，如果供受者之间存在不匹配免疫因素，输 血将可能诱导产生同种抗原免疫反应。避免血小板输血巾 的免疫反应是改善免疫性 PTR 的有效途径。国内输血领 域通常采用微量淋巴细胞毒交叉实验 ( microlymphocytoωxicity test，LCT) 为免疫性 PTR 患者 选择也A-相容性血小板输注，在一定程度上改善了 PTR 状态，但是由于四A 免疫的存在，不能从根本上改善免疫 性 PTR 状态，提高血小板输注效果。本课题的研究目的就 是在器官移植原理的指导下建立一种实验手段，在不必鉴 定患者的血小板反应性抗体类型的前提下，能够在短时间 内从有限的血小板资源中为患者选择合适的血小板输注， 有效地改善患者的免疫性 PTR 减少新的 HPA 免疫反应 的发生，帮助临床及时降低血小板减少病人的出血危险， 达到血小板输注的临床目的，减少有限的血小板资源的无 效使用，同时为血小板输注患者降低治疗成本。 方法:石家庄地区固定机采血小板供者档 案成员 220 名，其中另: 115 名，女: 105 名。年龄 18，....，40 岁， 平均 年龄为 28.8 岁。用 PCR-SSP (sequence-specific primers， SSP) 建立该选定人群的 HPA 特异性抗原基因 信息库 ，为 患者提供 HPA-配合型血 小板输注作准备，同时 调查血小 板特异性抗原的分布多态性，确定在血小板输注中具有免 疫意义的抗原。基因频率计算用基因直接计数法，并进行 Ha町rd句y 血小板受者为 来臼河北医科大学第三医 院、第四医院 和石家庄市平安 医院的患者:对随机供者血小板浓缩液发 生了输注无效、 又没有确定的可导致 PTR 的非免疫因素 存在、经检测血清中存在血小板反应性抗体(包括皿 A 和/或曰A 抗体)、 需要多次输注血小板的患者 28 名 :臼 血病患者 20 例，其他癌症化疗患者 4 例，再生障碍性贫 血 4 例。其中女性 13 例(有孕产史的 8 例)，男性 15 例， 均具有多次 (7 次以上)非去除白细胞性输血史，年龄 4.-..76 岁，平均年龄 36.2 岁。用简易致敏红细胞血小板血清学 技术(simplified sensitized erythrocyte platelet serology assay， SEPSA)检测患者血清中是否存在血小板反应性抗体;用 LCT 法鉴定血小板反 应性抗体的抗-HLA 特性， 并用 血A 谱细胞板检测 该抗体的群体反应活性 (Panel Reactive Activity ，PRA ) ; 采用抗原捕获 ELISA 法鉴定血小板 反应 性抗体的抗血小板 膜糖蛋白 的特异性:用 PCR-SSP 法鉴定 2 中文摘要 中文摘要 被检对象的 HPA 基因型;用 LCT 交叉实验检验供受者的 HLA 相容性。 输注效果判定:输注前及输注后 24h 进行 血小板计数，计算输注后 24h 的血小板增值 Ccorrected count increment CCI) 0 CCI= C 输注后血小板计数-输注前 血小板计数) x 体表面积 (m2)/输入血小板总数 D 输注血 小板后 24h 的 CCI4.0x 109fL为输注无效，高于此计数为 有效。 采用自身对照法，将 28 名患者的 98 次血小板输 泞分为 2 组:对照组为 60 次供受者之间 HLA 相容的 (HLA-compatible) 血小板输注(只考虑 HLA 的免疫作用， 不考虑 HPA 的兔疫作用，采用的技术为 LCT ;实验组 为 38 次供受者之间回 -配合性(旧A -matched)及肌A- 相容性血小板输注(同时考虑 HLA 和田A 的免疫作用)， 采用的实验技术为 PCR-SSP 和 LCT 0 根据患者血清中存 在的血小板反应性抗体的性质评价输注效果。统计推断用 2x2 表法。 结果:1.2