基因工程中涉及的分子生物学基础.pptVIP

一、遗传物质与DNA 本实验直接表明父代噬菌体的DNA进入到细菌中，变成了子代噬菌体的一部分，恰好符合是遗传物质的遗传特性。 二、DNA的结构与功能 核糖键是由一系列5’-3’糖-磷酸键作为主链和含有碱基突出组成的。 2、DNA的二级结构：双螺旋 3、DNA的三级结构：超螺旋结构 超螺旋结构的生物学意义 DNA分子形成高度致密的结构，使DNA分子的体积缩小 超螺旋贮存DNA分子的额外扭转应力，因此超螺旋的DNA分子比松弛的DNA分子具有更高的能量。对于负超螺旋，这一能量可使DNA更易于局部解旋，而DNA其他区段仍保持B构型。因此，负超螺旋有利于一切需要解旋的过程，例如DNA的复制和转录。 4、真核生物染色质与染色体 真核生物的每个染色体只包含一个DNA分子，在间期被称为染色质。染色质和染色体指DNA的包装水平不同。 染色质包括DNA、组蛋白、非组蛋白及少量RNA组成。 核小体是构成染色质的基本单位。 5种组蛋白H1、H2A、H2B、H3、H4 核小体 (nucleosome) 染色体的基本结构单位 组成： 核心颗粒 连接区 非组蛋白 染色质的高级结构 一级包装：核小体 二级包装：螺线管 三级包装：螺线管环 四级包装：染色体 三、RNA的结构与功能 RNA并非简单的传递遗传信息，而是通过各种类型的RNA剪接、RNA编辑和RNA再编码来控制遗传信息的表达。 RNA通过调控和催化蛋白质的生物合成而控制着生命的中枢。 RNA的种类 主要有三种类型: 1． 细胞质RNA （1） rRNA（核糖体RNA） 这部份RNA分子量最大，代谢稳定，存在于核糖体中（约占核糖体的60%），占细胞总RNA的80%。 tRNA（转移RNA）叫受体RNA 。在蛋白质生物合成过程中，它携带活化的氨基酸掺入到正在合成的肽链的正确位置。它占RNA总量的15%，为细胞中最小的，且种类很多。 它常常以游离状态存在于细胞质中，且每一种氨基酸都有其特异的一种或几种tRNA。 mRNA（信使RNA）: 这部分占RNA总量的5%，含量最少。它在rRNA、tRNA和mRNA这三种RNA中最不稳定，代谢活跃，更新迅速。 相对而言，原核细胞（如大肠杆菌）的mRNA半寿期较短（几秒或几分钟），而真核细胞的则较长。 真核生物mRNA上3`-端有polyA尾巴， 5`-端有一个帽子结构（ m7G-5`-ppp-5`-Nm)。 小分子RNA的种类和功能 snRNA： mRNA剪接 snoRNA：rRNA成熟加工 gRNA：RNA编辑 SRP-RNA：蛋白质分泌 端粒酶RNA：染色体DNA端粒合成 tmRNA：破损mRNA蛋白质合成的终止 antisenseRNA/micRNA(mRNA干扰互补RNA) 非翻译的类mRNA RNA：基因调节，应激信号 RNA的二级结构 RNA的三级结构 四、核酸的理化性质及其应用 核酸有强烈的紫外吸收特性，一般在260nm有最大的紫外光吸收值，而蛋白的最大吸收在280nm处，故可依此鉴定核酸中的蛋白质杂质。 核酸的理化性质及其应用 双链DNA缓慢加热，其溶液对紫外光的吸收值增加，该现象称增色效应。 DNA加热变性时，其紫外吸收光密度值达到最大值的一半时的温度，称熔链温度。 复性：指变性DNA在适当的条件下，两条互补链全部或部分恢复到天然双螺旋结构的过程。 退火：热变性的DNA经缓慢冷却的复性过程。(可以是不同来源DNA之间的复性)。 分子杂交：应用核酸分子变性和复性的性质，使来源不同的DNA或RNA片段，按碱基互补的关系形成杂交双链分子的过程。 ◆一、基因及其结构 指表达一种或多种蛋白质或功能RNA的遗传物质的基本单位。 一段制造功能产物的完整的染色体片段（a complete chromosomal segment responsible for making a functional product.*)。包含基因的产物、基因的功能性及完整性（包括一个蛋白质或RNA的全部编码序列和编码区之外对编码区转录功能所必要的非编码的调控区。） ◆一、基因及其结构 基因的三个基本特征：基因可自我复制、基因决定性状、基因可以突变 基因分为两类（是否转录和翻译）：结构基因、调控基因 一个基因不仅是编码有功能的蛋白质多肽链或RNA所必需的核酸序列（通常指DNA序列），而且还包括为保证