彗星试验方法的初步研究-环境科学专业论文.docxVIP

II II 摘 要 彗星试验方法的初步研究 彗星试验(Comet assay) 又称单细胞凝胶电泳试验(SCGE) 是一种快速 灵敏的检测单个细胞 DNA 断裂的新技术 由于其具备其它试验无可比拟的 优越性 因此应用前景十分广泛 为了在本实验室建立该方法 扩展该方 法在农药安全性评价中的应用 本研究采用公认的 DNA 断裂剂重铬酸钾溶 液为试验材料 设 5 个试验剂量 分别为 12.5 25.0 50.0 100.0 500.0μmol/L, 处理 CHL 细胞 2 个小时 然后对 CHL 细胞进行单细胞凝胶电泳试验 从 细胞的彗星图和试验数据分析可以看出 随着重铬酸钾溶液浓度的增大 彗星尾长明显增长 说明重铬酸钾溶液剂量越大 对 CHL 细胞 DNA 的损 伤越严重 且不同浓度重铬酸钾溶液与 CHL 细胞 DNA 损伤之间存在着明 显的剂量 效应关系 这些结果表明在本实验室条件下基本建立起来了该 方法 并且找出了适合本实验室条件下的 CHL 细胞彗星试验方法的条件 最合适的制片条件 改良的细胞染毒方式 受试物处理 CHL 细胞时间至少 为 2 小时 细胞裂解时间为 2~2.5 小时 DNA 解旋时间为 30 分钟 在电压 18~25V 电流 200~300mA 下 电泳 20~30 分钟 关键词 彗星试验 方法建立 Preliminary Studies on Conducting the Comet Assay Yang Hong-lian (Environmental Science) III III 新疆农业大学硕士学位论文 (Environmental Science) Surpervised by Cai Lei-ming Abstract The Comet assay, also known as the single cell gel electrophoresis (SCGE) assay, is a rapid, visual, and highly sensitive technique for measuring DNA breakage in individual cells. The technique is rapidly becoming a widely used analytical procedure because of its unique advantages. The objective of this study was to adapt the Comet Assay tech-nique to the test conditions of our laboratory. In this study, CHL cells were treated for 2 h with K2Cr2O7 solution at five different concentrations (12.5, 25, 50, 100, and 500 μmol/L). DNA damage was then determined using the Comet assay. Comet graphs of the cells together with associated data indicated that comet tail length increased as K2Cr2O7 concentration increased, thereby showing a dose-response relationship. Thus, the Comet assay was successfully adapted to the conditions of our laboratory. Optimum treatment conditions included the following: optimum conditions of slide preparation ; CHL cell treatment period at least 2 hr; CHL cell lysis period of 2 to 2.5 h; alkali unwinding period of 30 min; electrophoresis conducted for 20 to 30 min at 25 V and 300 mA. Key words: Comet assay, SCGE technique I I 缩 略 语 ALS 碱易变点 CHL 中国地鼠肺细胞 DMSO 二甲基亚砜 DPC DNA-蛋白质交联 DSBS 双链断裂 EB 溴化乙锭(Ethidium Bromide) EPA