恢复SFRP1基因表达对MGC803细胞增殖迁移的影响-临床医学(肿瘤学)专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 论文题目：恢复 SFRP1 基因表达对 MGC803 细胞 增殖迁移的影响 论文作者签名: 伍丹 指导教师签名: 伍尤华主任医师 论文评阅人 1 ： 罗招阳 教授 评阅人 2： 张志伟 副教授 答辩委员会主席： 苏琦 教授 委员 1： 贺修胜 教授 委员 2： 姜浩 教授 委员 3： 祖旭宇 副教授 委员 4： 戴文香 主任医师 答辩日期： 2015 年 5 月 19 日 南华大学学位论文原创性声明 本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及 取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外， 论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得南华 大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本 研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。本人完全意识到本声明的 法律结果由本人承担。 作者签名： 年 月 日 南华大学学位论文版权使用授权书 本学位论文是本人在南华大学攻读（博/硕）士学位期间在导师指导下 完成的学位论文。本论文的研究成果归南华大学所有，本论文的研究内容 不得以其它单位的名义发表。本人同意南华大学有关保留、使用学位论文 的规定，即：学校有权保留学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校 可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保 留学位论文；学校可根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文。同意 学校将论文加入《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》，并按《中国优秀 博硕士学位论文全文数据库出版章程》规定享受相关权益。同意授权中国 科学信息技术研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并 通过网络向社会公众提供信息服务。对于涉密的学位论文，解密后适用该 授权。 作者签名： 年 月 日 导师签名： 年 月 日 恢复 SFRP1 基因表达对 MGC803 细胞增殖迁移的影响 硕士研究生：伍丹 导 师：伍尤华主任医师 中文摘要 目的： 胃癌在我国属最常见的恶性肿瘤之一，其死亡率居各类恶性肿瘤 的第二位。由于胃癌早期临床症状不明显，多数患者确诊时已属中晚 期，然而接受姑息性化疗的晚期胃癌患者 5 年生存率小于 10%。因此， 寻找新的治疗靶点、研发新的化疗药物，对胃癌的治疗具有重大意义。 最新研究表明，Wnt 信号通路的异常激活与多种肿瘤的发生发展密切 相关，细胞表观遗传改变，导致抑瘤基因沉默是肿瘤的常见事件。由 于抑瘤基因甲基化具有可逆性，故通过甲基化转移酶抑制剂 5-氮杂 -2-脱氧胞苷(5-Aza-2-deoxycytidine，5-Aza-dC)处理胃癌 MGC-803 细 胞，分析 MGC-803 细胞 SFRP1 表达水平及对细胞生物学行为的影响， 为探讨 5-Aza-dC 在治疗胃癌临床应用提供实验依据。 方法： 1.体外培养胃癌 MGC-803 细胞，取对数生长期细胞，随机分为空白 对照组、1umol/L 5-Aza-dC 处理组、5umol/L 5-Aza-dC 处理组、 10umol/L 5-Aza-dC 处理组和 20 umol/L5-Aza-dC 处理组 umol/L。2. 用 噻唑蓝 MTT 法检测各组在 0h、12h、24h、48h 的 OD 值，观察 5-Aza-Cd 对 MGC-803 细胞生长抑制作用，绘制生成曲线抑制图，根据 MTT I 结果初步筛选抑制率较高浓度。3.取该浓度 5-Aza-dC，分别作用细胞 0h、12h、24h、48h，提取药物作用后细胞的 RNA 及蛋白，分别采用 RT-PCR 和 Western blot 实验检测 5-Aza-dC 干预不同时间后人胃癌 MGC803 细胞中 SFRP1 及 β-catenin mRNA 和蛋白表达的情况；4.应 用划痕实验探讨 5-Aza-dC 对 MGC-803 细胞迁移能力的影响。 结果： 1.MTT 结果显示，5-Aza-Cd 对 MGC-803 细胞生长有明显抑制作用, 并且存在剂量依赖性反应关系； 2. RT-PCR 结果显示，SFRP1 基因 mRNA 水平较未处理组升高 (p0.01)，而 β-catenin mRNA 水平较未处理组降低(p0.01），两者 mRNA 表达水平呈负相关，且具有时间依赖性。 3.Western blot 结果显示， SFRP1 基因蛋白水平较未处理组升高 (p0.01)，与 SFRP1 基因 mRNA 表达水平一致，β-catenin 蛋白表达 水平较未处理组降低，与 β-catenin mRNA 表达水平一致。 4.划痕实验结果显示：12 小时 5μmol/L 组 MGC-803 细胞愈合率为 (47.8%±3.1%)、10μmol/L 组 MGC-803 细胞愈