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【高考警示钟】 平板划线法纯化大肠杆菌时不同阶段灼烧接种环的目的不同 (1)第一次操作:杀死接种环上原有的微生物。 (2)每次划线之前:杀死上次划线后接种环上残留的菌种,使下次划线的菌种直接来源于上次划线的末端。 (3)划线结束后:杀死接种环上残存的菌种,避免细菌污染环境和感染操作者。 【典例训练2】从自然界微生物中筛选某菌种的一般步骤是:采集菌样→富集培养→纯种分离→性能测定。 (1)不同微生物的生存环境不同,获得理想微生物的第一步是从适合的环境采集菌样,然后再按一定的方法分离、纯化。培养噬盐菌的菌样应从________环境中采集。 (2)富集培养指创设仅适合待分离微生物旺盛生长的特定环境条件,使其群落中的数量大大增加,从而分离出所需微生物的培养方法。对产耐高温淀粉酶微生物的富集培养应选择____的培养基,并在_____条件下培养。 (3)接种前要对培养基进行_______处理。在整个微生物的分离和培养中,一定要注意在_______条件下进行。 (4)如图是采用纯化微生物培养的两种接种方法接种后培养的效果图,请分析接种的具体方法。 获得图A效果的接种方法是_______,图B效果的接种方法是_______。一同学在纯化土壤中的细菌时,发现培养基上的菌落连成一片,最可能的原因是_______,应当怎样操作才可避免此种现象? ____________________________________________。 (5)如果探究温度对纤维素酶活性的影响,自变量是______,应该保持__________________等不变(至少答两项)。 【解题指南】 1.知识储备 (1)菌种筛选的原理和方法; (2)微生物纯化培养的具体方法和情境分析。 2.解题关键:了解选择培养基配制的一般规律和具体应用,并结合实验现象分析纯化培养的接种方法。 【解析】(1)筛选菌种应从适于目的菌种生长、繁殖的环境中寻找,故培养噬盐菌应从高盐环境中采集。 (2)富集培养时培养基及培养条件应能促进目的菌的生长、繁殖。 (3)微生物的分离及培养中必须保证无菌,包括培养基的灭菌和操作过程的灭菌等。 (4)纯化培养中接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法,前一种方法形成的菌落分布较均匀,后一种方法形成的菌落分布不均匀,先划线的部分菌落密集甚至相连,后划线的部分菌落分布稀疏。 (5)探究温度对酶活性的影响时,温度为自变量,酶活性为因变量,其他变量如底物和酶的用量、pH、反应时间等均为无关变量。 答案:(1)海滩等高盐 (2)以淀粉为惟一碳源 高温 (3)高压蒸汽灭菌 无菌 (4)稀释涂布平板法 平板划线法 菌液浓度过高 增大稀释倍数(或培养过程被杂菌污染 严格无菌操作;或用接种环划下一区域前接种环没有灭菌 每划一个新区域前都要对接种环进行灭菌处理)(原因与操作要对应) (5)温度 纤维素的量与浓度、反应时间、pH 【变式备选】如图表示平板划线法分离纯化细菌示意图。根据所学生物学知识,完成下列问题。 (1)微生物所需的营养成分一般包括_______、_______、水和无机盐。 (2)培养微生物时,除考虑微生物生长所需的营养外,还要考虑微生物生长所需的温度、_______以及是否需要O2等。 (3)对培养基进行灭菌时,多采用__________法,而对接种环或涂布器灭菌时则用__________法。 (4)平板划线时,为保证每次划线都从上次划线末端的微生物浓度开始,所以每次划线前都要___________,平板划线结束后,最后一次划的线不能与第一次划的线___________。 (5)脲酶可以将尿素分解为NH3,从而使尿素溶液pH升高,这可用__________试剂来检验。用纤维素作惟一碳源的培养基培养微生物,得到的纤维素分解菌中可能还混有___________。 【解析】(1)(2)培养基中一般含有水、无机盐、碳源、氮源等物质;培养基中除含有营养物质外还需提供适宜的温度、pH、O2等。(3)培养基常采用高压蒸汽灭菌,玻璃器皿常采用干热灭菌,接种环等金属器具常采用灼烧灭菌。(4)考查平板划线法的操作方法,如果划线相重合则不能分离出纯种。(5)酚红可检验碱性溶液,用纤维素作惟一碳源的培养基培养微生物,得到纤维素分解菌,但自养微生物可以利用空气中的CO2作为碳源,也能生存,需要进一步分离。 答案:(1)碳源 氮源 (2)pH (3)高压蒸汽灭菌 灼烧灭菌 (4)对接种环灼烧灭菌 相交(相接、相连、交叉等) (5)酚红 自养微生物(硝化细菌) 微生物的筛选与计数 1.筛选菌株 (1)原则:人为提供有利于目的菌生长的条件,同时抑制或阻止其他微生物的生长。 (2)菌株筛选原理
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