利用SpectraMaxi3x多功能微孔板读板机所具有的超灵敏化学发光.PDF

利用SpectraMax i3x多功能微孔板读板机 所具有的超灵敏化学发光检测功能进行细胞 活力和细胞毒性的评价 简介 方法 优势： SpectraMax i3x是Molecular Devices公 准备试剂 • 仪器具有超高灵敏度化学发光 司最新推出的一款多功能微孔板读板机， 使用前预先将CellTiter-Glo缓冲液和底物 可利用仪器所具有的化学发光检测功能， 解冻并且平衡其至室温，将CellTiter-Glo 检测功能，最低至10个细胞/ 进行细胞活力和细胞毒性相应检测。仪器 缓冲液加至含有CellTiter-Glo底物的棕色 每孔； 可灵敏、快速检测出培养基中活细胞的数 小瓶中，按照试剂盒说明书提示，将试剂 • 微孔板读板高度自动优化设 目 和 经 相 应 处 理 后 细 胞 毒 性 情 况 。 轻轻反复颠倒进行混匀。对于生物化学发 置，可提高检测信号强度 Promega公司推出的CellTiter-Glo试剂是 光细胞毒性检测试剂盒，其中包含了1瓶 利用了萤火虫荧光素酶反应体系中需要 AK检测试剂，此试剂使用前预先将1.1ml • 软件预置模板可以更快分析出 ATP参与才能使其发光的特点，化学发光 AK试剂缓冲液加入其中并轻轻混匀，需在 检测结果 信号强弱取决于培养基中ATP含量的高 室温环境下平衡15分钟后使用。这个10X 低，也就是依赖于其中活细胞数目的多 的AK试剂的储存液需要稀释后才能成为试 少。来自于BioVision公司基于生物化学发 剂缓冲液。 光原理的细胞毒性检测试剂盒，目的是检 测腺苷酸激酶(AK)的含量，AK为一种存在 于所有细胞中的常见蛋白，当破坏了细胞 膜完整性后其会释放至培养基中，AK可转 细胞数目与化学发光信号关系 化ADP至ATP，所以可以利用类似方式进 Hela 细胞培养在含有10%胎牛血清和双抗 行化学发光检测。 的MEM培养基中，细胞经胰酶消化后，使 其悬浮于培养基中进行计数。处理后的细 胞铺在96孔板中，经细胞培养基稀释后其 材料 密度从50,000细胞每孔/100ul至10个细胞 每孔/100ul。如果将细胞铺在384孔板时， • CellTiter-Glo Luminescent Cell Viability 稀释后密度从12,500细胞每孔/25ul至6个 Assay (Promega P/N G7570) 细胞每孔/25ul。对照孔中仅需加入细胞培 • Bioluminescence Cytotoxicity Assay 养基用于检测其背景的化学发光信号值。 Kit (BioVision P/N K312-500) • HeLa 细胞(ATCC P/N CCL-2) 细胞试验过程中，精确的细胞数目可用于 • 黑色底透 96孔细胞培养板 (Corning P/N 生成标准曲线，将不同体积的CellTiter- 3904) Glo试剂加入相应的孔