蝗绿僵菌GTPase激活蛋白基因Gyp3的功能研究-药学专业论文.docxVIP

重庆大学硕士学位论文英文摘要 重庆大学硕士学位论文 英文摘要 PAGE PAGE IV cell wall integrity, antioxidant capacity, the non ion tolerance to osmotic pressure： ΔGyp3 exhibited remarkable resistance to the cell wall disturbing agents CR、SDS and CFW. The conidial yielda and appressorium formation on locust hind wings of the ΔGyp3 was no difference among WT and CP. 3、Gyp3 affects conidial germinationon on locust hind wings, affects pressure of appressorium on locust hind wings, affects fungal growth in the hemolymph, affect the transcriptional level of of hydrolytic enzyme，deletion exhibited a reduced level of pathogenicity：deletion of Gyp3 has a declined fungal growth in the hemolymph of the host insect in vivo and in vitro; the half germination time (GT50) of the ΔGyp3 was delayed; the transcriptional level of of hydrolytic enzyme and pressure of appressorium of ΔGyp3 had a significant reduction compared with WT、CP. 4、Gyp3 does affect the transcriptional level of Rab5, and inactivates the Rab5 in Gyp3 deletion stain： Keywords: Metarhizium acridum, GAP, stress tolerance, Rab, virulence 重庆大学硕士学位论文目录 重庆大学硕士学位论文 目 录 目 录 中文摘要I 英文摘要 II 缩 略 词VI 1 绪 论 1 1.1 引言 1 1.2 研究背景 1 1.2.1 外界压力对病原真菌的影响及其致病机理研究进展 1 1.2.2 Rab5 蛋白家族相关研究进展 2 1.2.3 GTP 酶活化蛋白 GYP3 的相关研究进展 4 1.3 立题依据及研究目的 5 1.4 研究内容 6 1.5 技术路线 6 1.6 本课题的创新之处 6 2 绿僵菌 Gyp3 基因的克隆及功能研究 7 2.1 实验材料 7 2.1.1 供试菌株及昆虫 7 2.1.2 载体质粒 7 2.1.3 主要试剂及试剂盒 7 2.1.4 主要培养基及实验溶液的配制 8 2.1.5 主要器材与仪器设备 9 2.2 主要方法 10 2.2.1 真菌孢子和附着胞 RNA 的提取并反转为 cDNA 10 2.2.2 Gyp3 cDNA 测序 12 2.2.3 真菌基因组 DNA 的大量提取 15 2.2.4 生物信息学分析 15 2.2.5 Gyp3 基因敲除、回复载体的构建 16 2.2.6 制备农杆菌感受态细胞 19 2.2.7 电转化农杆菌并与绿僵菌的共培养 20 2.2.8 转化子的筛选和验证 20 2.2.9 Gyp3 半定量及定量实验 23 2.2.10 孢子生长能力、产孢量、萌发率分析 24 2.2.11 抗逆能力分析 24 2.2.12 测定菌株对高渗透、细胞壁抑制剂的耐受能力 25 2.2.13 毒力测定及分析实验 25 2.2.14 菌丝侵染切片观察 27 2.2.15 测定蝗虫后翅上孢子萌发率和附着胞形成率 27 2.2.16 膨压测定 28 HYPERLINK \l _TOC_250003 2.2.17 Ypt5 和 Ypt51 及 Pr1a、Chi 半定量及定量实验 28 2.2.18 数据统计及显著性分析 29 2.3 实验结果与分析 29 2.3.1 Gyp3 基因生物信息学分析 29 HYPERLINK \l _TOC_250002 2.3.2