东锦龟摩尔摩根氏菌的分离鉴定和药敏试验-江苏农业科学.PDF

江苏农业科学　２０１３年第４１卷第１０期 — ２０５— 王伟?，潘连德．东锦龟摩尔摩根氏菌的分离鉴定和药敏试验［Ｊ］．江苏农业科学，２０１３，４１（１０）：２０５－２０８． 东锦龟摩尔摩根氏菌的分离鉴定和药敏试验 王伟? ，潘连德 （上海海洋大学省部共建水产种质资源发掘与利用教育部重点实验室，上海２０１３０６） 　　摘要：从患耳部感染性疾病的东锦龟（Ｃｈｒｙｓｅｍｙｓｐｉｃｔａｐｉｃｔａ）耳部病灶处分离获得１株细菌。为进一步检测该菌致 病性，通过腹腔注射和浸泡感染２种方式对健康巴西彩龟人工染毒，致死率分别为８０％、７０％，且从人工感染病龟体 内再次分离到相同菌株。通过分离培养、形态学观察及生理生化试验等诊断，以及进一步的１６ＳｒＤＮＡ基因序列比对 和系统发育分析都表明，该菌为摩尔摩根氏菌（Ｍｏｒｇａｎｅｌｌａｍｏｒｇａｎｉｉ）。药敏试验结果显示，该菌对庆大霉素、妥布霉 素、链霉素、氧氟沙星、头孢他啶、哌拉西林、氯霉素高度敏感，而对头孢唑啉、四环素、阿莫西林、利福平、氨苄西林不 敏感。 　　关键词：东锦龟；人工感染试验；１６ＳｒＤＮＡ；摩尔摩根氏菌；药敏试验 ＋ 　　中图分类号：Ｓ９４７．１２　　文献标志码：Ａ　　文章编号：１００２－１３０２（２０１３）１０－０２０５－０３ 　　东锦龟（Ｃｈｒｙｓｅｍｙｓｐｉｃｔａｐｉｃｔａ）属小型水栖龟类，各种肉 ２８℃恒温培养１２ｈ，从营养琼脂平板上挑取特征一致的单个 类、瓜果蔬菜、混合饲料均食。由于其娇小体型和对人工圈养 菌落进行纯培养，并挑取菌落进行革兰氏染色镜检观察。将 的适应能力，通常被作为宠物饲养，东锦龟同时具有较高的食 纯培养菌转接于斜面培养基上，长出菌苔后，向试管加液体石 ［１－２］ 用和药用价值 。近年来随着龟类市场需求旺盛，龟类养 蜡后封口保存于４℃冰箱。 ［３］ 殖规模和养殖密度不断扩大，各类疾病突发显著 。目前对 １．２．２　人工感染试验　将巴西彩龟随机分组，使每组龟平均 于东锦龟疾病治疗的研究处于起步阶段，同时由于养殖户缺 体重相同。设２个试验组和２个对照组，每组 １０只龟，共 乏防病治病知识，一旦发病往往滥用抗生素，导致疾病防治效 ４０只龟。将分离菌株 ＣＰＰ１２０５０５接种营养肉汤培养基， ［４］ 果不理想，给养殖户带来了严重的经济损失 。上海海洋大 ２８℃恒温培养１２ｈ。对照麦氏比浊管用无菌水稀释，制成 ８ 学攀世水族宠物健康中心发现一只患病东锦龟，症状为双侧 浓度为３×１０ＣＦＵ／ｍＬ的菌悬液备用，采用２种方法感染： ８ 耳部肿胀，鼓膜透明，病龟常用同侧前爪挠其头部。将耳部感 （１）腹腔注射法：试验组注射浓度为３×１０ＣＦＵ／２０ｇ，对照组 染龟类的患部切开，发现固体干酪样物质充满中耳，容易剥 用无菌生理盐水代替。观察龟的发病情况，连续观察３０ｄ，对 离。在无菌条件下从其耳部病灶分离出１株细菌。本研究将 发病龟进行细菌再次分离，并进一步鉴定；（２）浸泡感染：试 ８ 该细菌人工感染巴西彩龟以明确其致病性，通过镜检观察、生 验组浸泡浓度为３×１０ＣＦＵ／２０ｇ，对照组用无菌生理盐水代 理生化试验、分子生物学方法对其进行鉴定，并通过药敏试验 替，浸泡１２ｈ后常规饲养。观察龟发病情况，连续观察３０ｄ， 确定该病菌的敏感药物，以期