《造血干细胞》幻灯片.ppt

;造血干细胞的定义：; 特征;分裂方式; 现已知道，造血干细胞不是纯一的细胞群体，而是由不同年龄等级的干细胞组成。这些不同年龄等级的干细胞的表面抗原、免疫表型和粘附分子的表达不一，生物学特性也有一定的差异。 ;造血原理; 造血干细胞进一步分化发育成不同血细胞系的定向干细胞。定向干细胞多数处于增殖周期之中，并进一步分化为各系统的血细胞系，如红细胞系、粒细胞系、单核-吞噬细胞系、巨核细胞系以及淋巴细胞系。; 由造血干细胞分化出来的淋巴细胞有两个发育途径，一个受胸腺的作用，在胸腺素的催化下分化成熟为胸腺依赖性淋巴细胞，即T细胞；另一个不受胸腺，而受腔上囊（鸟类）或类囊器官（哺乳动物）的影响，分化成熟为囊依赖性淋巴细胞或骨髓依赖性淋巴细胞，即B细胞。并分别由T、B细胞引起细胞免疫及体液免疫。如机体内造血干细胞缺陷，则可引起严重的免疫缺陷病。 ;;;造血干细胞来源;不同来源造血干细胞的比较： 　　; ;造血干细胞的表面标志; 人的造血干细胞表面标志包括CD34+、CD38－、Lin－、Thy-1+、Sca-1+、HLA-DR+、LFA-1+、CD45RA－、CD71－等。人类造血干细胞还对5-氟脲嘧啶和4-氢过氧环磷酰胺有抗性。; 在干细胞不同的分化阶段，有不同的表面标志表达，故不同的表面标志已成为区分造血干细胞分化阶段的重要标志。 祖细胞的表面标志为CD34+ Lin+ ，谱系特异性抗原包括粒系CD11、13、15、16；单核系CD14；B淋巴系CD19、20、21、22；T/NK系CD2、11、25、7、56；红系CD47、59、71；巨核系CD31、41、42、61、63、107等。; CD34是人们普遍认同的造血干／祖细胞的代表性表面标志，随细胞分化成熟逐渐减少甚至消失。CD34抗原分子量为105—120KD，为高度糖基化的I型跨膜糖蛋白。CD34+造血细胞是一组异质性细胞群体，可进一步分化为CD34+ CD38+和CD34+ CD38-两个亚群。CD34+细胞群中90％为祖细胞，极少为造血干细胞。; 虽然CD34+细胞不全是造血干细胞，但是造血干细胞应全部表达CD34分子，所以通过筛选CD34+细胞至少可以使造血干细胞得到富集。随着造血干细胞的分化成熟，CD34表达水平逐渐下降，成熟血细胞（Lin+）不表达CD34。 而最近的一些研究显示，CD34+Lin-造血细胞又起源于CD34-Lin-。CD34表面标志从无到有，又从有到无，充分显示了造血干/祖细胞产生、发育、分化和成熟的全过程。;造血干细胞的分离纯化; 通常先利用密度梯度离心等方法去除待分离物中的红细胞和成熟粒细胞等成分，获得单个核细胞，从而使CD34+细胞初步富集；然后利用CD34分子特异的抗体标记单个核细胞，通过荧光激活细胞分选(fluorescence activated cell sorting, FACS)、流式细胞仪分离、免疫吸附系统（包括淘洗技术、免疫吸附柱层析、免疫磁珠等）等方法将被标记的CD34+细胞与未被标记的CD34—细胞分离开来，即获得纯化的CD34+细胞。 ; 其中，FACS系统造血干细胞（CD34+）分选纯度达到95%，但是，成本较高，仪器也较贵，而免疫磁珠分离系统分离量大，分离纯度和细胞质量也能够满足临床要求，已经被临床工作者接受。 ; 另外，也可以利用造血干细胞大多处于静止期，对活体染料拒染的特性对其进行富集纯化。例如，采用RNA结合染料Pyronin Y、线粒体结合染料Rhodamine 123或DNA结合染料Hochest 33342均可用于造血干细胞的纯化。新近，还有人根据造血干细胞移植后迅速向骨髓归巢的特性，建立了一种体内分离造血干细胞的方法，这是利用造血干细胞的功能特性来对其进行分离的。;造血干／祖细胞的体外培养和诱导分化; 此外，用原代胚胎成纤维细胞、骨髓基质细胞或一些相关的细胞系等作饲养层细胞，可为造血干／祖细胞的体外扩增和分化提供适宜的造血微环境，在造血细胞的分化、发育中起至关重要的作用。Hagihara等研究证实，用鼠基质细胞HESS-5作饲养层，在有人重组细胞因子存在时，可有效扩增造血干／祖细胞，特别是CD34+CD38-细胞，并有助于分化成DCs的原始骨髓干细胞快速而持久的产生。;造血干细胞的检测方法;; 但是，由于异体移植存在免疫排斥的问题，多年来对人骨髓细胞造血活力的检测一直依赖于体外实验。近年来，随着动物模型的不断发展，使研究人造血干细胞体内重建造血活力成为可能。在这些动物模型中，最为可靠的是绵羊子宫内胎羊移植系统。