抗HBsAg人源单链可变区抗体的筛选与可溶性抗体-VirologicaSinica.PDF

维普资讯 第 16卷2期 中 国 病 毒 学 16f2 105 108 2001年 6月 VIROLOGICA SINICA JMH 2001 抗 HBsAg人源单链可变区抗体的筛选与可溶性抗体的表达 钟彦伟，成军 ，施双双，夏小兵，李克，董菁，刘妍，杨继珍 解放军三0二医院传染病研究所基因治疗研究中心．北亩 100039) IdentificationandExpressionofHumanScFvAgainstSurfaceAntigen ofHepatitisB VirusinE ．coil ZHONGYanwei，CHENGJun．SHIShuang-shuang，elal (InstituteofInfectiousDiseasas，The302Hospital P ，Beifing 100039，China) Abstract：UsingHBsAgantigenpurifiedfrom }ⅢsAgpositive$ar~Ii1asthecoatingantigen，thesin— gle—chainvariablefragment(ScFv)antibodvtoHBsAghasbeenscreenedandidemiffedfrom asemi syntheticphagelibrarybyphagedisplaytechnique TheSfiI／NotIscFvDNAfragmentwasharvested from PHENI—ScFvandinsertedintopCANTAB5E．andthe recombinantplasmidDNA wasusedto transf0rm competenthostXL1Blue．Afterinductionwith IP，rG fnr20hrs，theexpressed }Ⅲ sAg ScFvinthesupernantantofXL1一B1Hewasprecipitatedwith50％ ammonium sulfatedanddemonstrat edthemolecularweightisabout28kDabvSD PAGE Thereactivityandspedficityhavebeencon— firmedbyenzyme—linkedirnmuno-sorbentassayfELISA)．TheidentificationandexpressionofHB— sAgScFvfrom E coliweresuccessfullyachieyed Keywords： g；Phage；SinglechainFvantibody；Screening ；Expression 摘要：采用噬菌体表面展示技术，以从乙型肝炎病毒(HBV)表面抗原 ( Ag)阳性血清超速离心纯化的HBsAg为 圃相抗原．趴噬菌体单链可变区半合成抗体库中经过 5轮 “吸附 洗脱一扩增 筛选过程．获得特异性较强的 -[IB~Ag 人源单链可变区抗体 (ScFv)克隆并提取质粒，经 s I／,NbtI酶切鉴定后．亚克隆到pCANTAB5E表达载体中，转 化大肠杆菌XL1一Blue。经 IPTG诱导后，表达的可溶性 HBsAg特异性ScFv以50％硫酸胺沉淀．经SDS—PAGE电泳 表明，XL1．Blue中表达的HBsAg可溶性ScFv的分子量约28kD。免疫活性检测结果表明，该单链抗体具有鞍强的 抗原结合活性和特异性 HmAg人源单链抗体的筛选和表达成功，为今后 HBsAg人源抗体的研究和应用奠定厂 基础。 关键词：HBsAg；噬菌体 ；单链抗体；筛选；表达 中图分类号：R51262 文献标识码：A 文章编号：1003—5125c2