陈振文教授WHO第5版修订解读.pptVIP

国家人口计生委科学技术研究所 WHO人类精液实验室检验及处理手册（第5版） 修订解读 国家人口计生委科学技术研究所 陈振文 背景 由于人类精液检测程序标准化的需求的不断增加，WHO于1980年首次出版了《人类精液及精子-宫颈粘液相互作用实验室检验手册》。在此后的30年中，手册被翻译为多种语言，并先后进行了三次修订，在世界范围内得到了广泛的认可和应用。 随着近年来男科学和生殖医学的快速发展 　，不少原有的概念和诊疗建议需要修订。 为此，WHO组织成立了专门的委员会来负责这项工作，编写制订了新一版的手册，以期达到更好的标准化，提高精液分析的质量。 第5版《手册》提纲 一、精液分析 标准程序：常规分析、抗体包被精子、非精子成分； 可供选择的试验：精子多发性缺陷指数、白细胞免疫细胞化学染色、精子宫颈粘液相互作用、精浆生化、CASA； 研究试验：活性氧、顶体反应、精子卵细胞相互作用、精子透明带结合、去透明带仓鼠卵穿透试验、精子染色质检测等。 第5版《手册》提纲 二、精液处理 精子制备技术 精子冷冻保存 三、质量保证 四、附录 “精液分析” 部分的修订主要涉及： 精子数量的测定； 精子活动力分级； 精子形态学评估； 精液参考值范围。 精子密度检测 对精子数目检测中的精液稀释方法及计数池面积进行了更改，每份标本均重复稀释、取样2次，各自计数至少200个精子，并强调了抽样误差的重要性和所获得的计数结果的可靠性。 一次射精中的精子总数能够提供反映睾丸功能的更为精确的信息，因此，新版手册强调必须精确地测定精液体积。 精液采集和体积测定 检测前必须充分混匀精液，以获得有代表性的样本。 精液是不均匀的。 精子密度检测 精子密度检测 要精确测定精子密度，必须根据对所观察的体积中的精子数目的粗略估计，来确定精子的稀释倍数。 所观察的体积取决于显微镜视野的面积和计数池的深度。对于×40的物镜和孔径为20 mm的×10目镜，所观察的体积大约为 4 nl（即4×10-9 升）。 精子密度检测 精子密度检测 计数哪个精子？ 计数中央正方形内的所有精子。（天蓝色正方形内的区域） 避免重复计数。 绿圈表示要计数的精子，红圈表示不应计数的精子。 计数哪个精子？ 当精子压在线上时，计数左侧和下边的精子 计数多少精子？ 精子数目的测定值的准确性依赖于所计数的精子数量。在Poisson分布中，计数（N）的标准差是它的平方根（√N），95%可信区间大约是N ± 1.96 ×√N（接近N ± 2×√N）。 计数200个精子，那么标准差就是14，95%可信区间就是172~228。如果计数400个精子，标准差是20，95%可信区间是360~440。 为了减低抽样误差，必须计数足够数量的精子。新版手册推荐每份标本的两个重复样本各自计数至少200个精子。 精子数低的标本的检测 当精子密度过低时，精子的计数常常存在很大的抽样误差，而且需要检测很多个显微视野，尤其是检测离心后的充满碎片杂质的片子往往不够清晰，因此“无精子症”的诊断容易受到影响。 新版本建议：根据检测目的和要求的不同，对“少精子症”和“可疑无精子症”的标本分别采用不同的处理方法。 是否真的“无精子症”？ 精子数低的样本：不必精确测定时 粗略估计 如果4/×400 HPF (或16/×200 HPF)，则说明密度为 “ 2×106 /ml” 存在精子吗？ 取1 ml 精液，离心3000g×15 min；弃上清，留下50μl液体； 取2份10μl 沉淀加于载片，分别加盖22mm×22mm盖片(20μm深)； 观察整个盖片 (2×480个视野)；如果有精子，则为“隐匿精子症”。 存在活动精子吗？ 将40 μl 精液置于 24mm×50mm 盖片下 (33μm深)； 观察整个盖片 (~1200个视野)；如果见到活动精子，则计数有多少。 注意：以上过程并不精确； 少的精子 = 大的计数误差； 未见精子 ≠ 没有精子存在； 0 的95%可信区间上限= 3.7。 精子数低的样本：需要精确评估时减少稀释倍数、测定更大的体积 精子活动力检测 精子前向运动的情况与受孕具有密切的关联；新版手册中一个重要的修订是精子活动力的分类方法。 精子活动力的分类 前向运动（Progressive motility，PR） 非前向运动（Non-progressive motility，NP） 不运动（Immotility，IM ） 精子活动力检测 室温或37度评估，深度20微米，允许精子自由运动 深度D（mm） = 体积V（μl, mm3）/