课件：乙肝疫苗生产发展简介.ppt

Revaccination—疫苗的加强注射 1，初次免疫若干年后，抗体可降低至可检测水平以下。 2，可检测抗体持续时间的长短直接和3针免疫后抗体的峰值大小有关。 3，美国疾病控制中心（CDC）的免疫咨询委员会（ACIP）主张：对于一个免疫状态正常的已经接受个乙肝疫苗免疫的人，5年内是不需要加强注射的。5年以后可根据抗体水平的高低，决定是否进行加强注射。 乙肝疫苗的人体实验 1，安全实验(safety test)。 2，血清学实验。 (Immunogenicity test) (血清阳转率和抗体滴度） 3，保护力实验－母婴阻断。 (efficacy test) 4，大规模人群免疫后的流行病学观察。 (efficacy test) 乙肝疫苗的免疫策略 乙肝疫苗的目标人群 低流行 高流行 高危人群: 医务工作人员 血液透析人员 静脉注射毒品人员 男性同性恋人员 所有新生儿 THANK YOU SUCCESS * * 可编辑 公司 菌种的表达水平 纯化的 收率 北京 深圳 50mg/L 20% 大连 汉信 150-200mg/L 15% 华兰 生物 200-300mg/L 20% 新乡华兰，大连汉信，北京天坛 华兰：菌种好，表达水平高，纯化收率高，所以，总体而言，华兰公司的技术更为先进。 北京生物制品研究所(天坛生物)生产的乙肝疫苗的基本情况： 生产技术：从美国MERCK公司引进。 年产量：1000万人份，3000万支。 生产设备：从美国购进。 基本技术资料： 菌种：重组酿酒酵母 表达水平：50mg/L 表达效率：1,35%(表面抗原蛋白/酵母总蛋白） 纯化收率：20% 发酵罐工作体积：500L 一次发酵所得抗原量：50mg/Lх500L=25g 纯化后所得抗原量25gх20%=5g 可生产疫苗量5,000,000/5=1,000,000支 北京天坛的 弱项和不足：表达水平低，抗原数量少，每剂疫苗只含5微克或10微克的抗原，比华兰疫苗抗原含量少一倍，所以抗体滴度低和抗体持续时间较短。 北京天坛和新乡华兰表达 水平和抗原产量的比较 表达水平 抗原产量 北京天坛 50微克 低 新乡华兰 300微克 高 北京天坛和新乡华兰疫苗抗原含量和抗体反应的比较 ? 每剂疫苗 抗原含量 抗体滴度 抗体持续时间 北京天坛 5微克（儿童） 10微克（成人） 低 短 华兰公司? 10微克（儿童） 20微克（成人） 高 长 大连汉信和新乡华兰纯化步骤和纯化收率的比较 纯化步骤 纯化收率 ?大连汉信 多 低于20% 新乡华兰 少 高于20% 汉逊酵母和啤酒酵母的比较 重组汉逊酵母的特点 （甲基营养型酵母） 甲基营养型酵母：以甲醇为唯一能源和炭源的酵母。 1,多个HBsAg基因拷贝被整合到染色体中，遗传稳定性好。 2,发酵过程中不产生乙醇，黏度小，可实现高密度培养。 3,高效表达HBsAg 400-1000mg/L。4,发酵过程中均使用化学合成培养基，不使用酵母粉等营养成分，生产成本低。 5，生物安全性好，汉逊酵母是存在于土壤，水中的一种酵母种群。它不含人和动物的病原体，不产生内毒素。按照国外基因技术法规，汉逊酵母被列为基因操作生物安全性1组。与酿酒酵母属同一生物安全等级。国外生物安全委员会还将汉逊酵母选为典型的工业菌株的研究模型。 重组汉逊酵母乙肝疫苗生产工艺 菌 种 小 三 角 瓶 大 三 角 瓶 种 子 发 酵 罐 生 产 发 酵 罐 细 胞 破 碎 THANK YOU SUCCESS * * 可编辑 去除细胞碎片 疏水层析 离子交换层析 凝胶过滤 除 菌 过 滤 铝 吸 附 种子批系统 SEED LOT SYSTEM 在乙肝疫苗的 生产过程中采用种子批系统，即由原始种子批制备主代种子批，由主代种子制备工作种子批，每次发酵都由工作种子批中取一支菌种接种三角瓶.种子批保存在液氮或－80℃的冰箱中。其目的是为了批与批之间菌种的差别降至最低。 重组汉逊酵母乙肝疫苗的人体试验结果 A，小学生： 选择348名健康小学生（HBsAg,抗-HBs,抗-HBc阴性）年龄在 6-9岁之间，随机分为3组，每组接种1批 疫苗，免疫剂量为10ug/0,5