生物化学实 验实验基本知识教材编辑.ppt

生物化学实验Biochemical Experiment;;;;;容 量 瓶;液体的量取;;液体的倾倒;滴管的使用;试纸的使用;;;;一定质量分数的溶液的配制;滤纸的折叠;物质分离与提纯－－过滤;萃取与分液;实验内容安排;;1　实验目的 掌握蛋白质、酶、核酸、糖等重要物质的分离、纯化和测定技术的原理及方法； 掌握生物化学的基本知识、基本理论及基本实验技能； 培养分析和解决问题能力以及严谨细致的科学作风、创新能力等综合素质。 ;2 通过生物化学实验应该做到;3.1 实验记录 实验前写好实验预习报告(钢笔和园珠笔)。 实验中应及时准确地记录(专用纸，事先在记录纸上设计好各种记录格式和表格）所观察到的现象和测量的数据。 实验记录要注意有效数字，如吸光度值应为“0.050”，而不能记成“0.05”。每个结果都要尽可能重复观测二次以上，即使观测的数据相同或偏差很大，也都应如实记录，不得涂改。 实验中要详细记录实验条件，如使用的仪器型号、编号、生产厂等；生物材料的来源、试剂的规格、试剂的浓度等。 ;3 实验记录与实验报告;4 实验成绩评分方法;生物化学实验技术理论;1903年，俄国科学家M.C.Jber首创了一种从绿叶中分离多种不同颜色色素成分的方法，命名为色谱法(Chromatography)，由于翻译和习惯的原因．又常称为层析法。 80多年来，层析法不断发展，形式多种多样。50年代开始，相继出现了分配层析、离于交换层析、凝胶层析、亲和层析、吸附层析等。 几乎每一种层析法都已发展成为一门独立的生化高技术，在生化领域内得到了广泛的应用。;一、层析技术;1、层析技术原理;2、层析技术分类;3、常用的层析原理;128;纸层析;（2）离子交换层析;示意图（交换树脂表面）;示意图（离子交换过程）;示意图;（3）吸附层析;吸附层析示意图;（4）亲和层析;;（5）凝胶过滤;;电 泳 技 术;一.电泳的概念;二.电泳技术分类;三.电泳技术基本原理;2.影响电泳速度的因素;四.几种常见电泳的比较;五.聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳原理;五.聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳原理;五.聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳原理;五.聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳原理;5.盘状聚丙烯酰胺凝胶电泳原理;5.盘状聚丙烯酰胺凝胶电泳原理;A. 样品的浓缩效应;缓冲液成分及pH的不连续性导致蛋白质样品浓缩效应示意图;E：每厘米的电压降 E＝I(电流强度)/?(电导率) E与电泳速度成正比 电泳开始后，由于快离子泳动率最大，在快离子后面形成一个离子浓度低的低电导区，产生较高的电位梯度，使蛋白质和慢离子加速移动，蛋白质样品被进一步浓缩。 ;E：每厘米的电压降 E＝I(电流强度)/?(电导率) E与电泳速度成正比 电泳开始后，由于快离子泳动率最大，在快离子后面形成一个离子浓度低的低电导区，产生较高的电位梯度，使蛋白质和慢离子加速移动，蛋白质样品被进一步浓缩。 ;A. 样品的浓缩效应;A. 样品的浓缩效应;A. 样品的浓缩效应;A. 样品的浓缩效应;A. 样品的浓缩效应;B.电荷效应;C.分子筛效应;;一、实验目的;二、实验原理;;三、仪器、材料和试剂;四、操作步骤与方法 ;;　　　五、实验结果与讨论　　;六、注意事项;七、思考题：;;实验原理 实验材料与仪器 实验试剂 实验步骤;实验原理;实验材料与仪器;实验试剂;实验步骤;3．电泳：在电泳槽内加入缓冲液，使两个电极槽内的液面 等高，将膜条平悬于电泳槽支架的滤纸桥上。膜 条点样的一端放在负极上。通电，电流强度每条 膜1mA(注意强度),电泳时间约为50分钟。 4．染色：电泳完毕后将膜条取下并放在染色液中浸泡5分 钟。 5．漂洗：将膜条从染色液中取出后移置到漂洗液申漂洗数 次至无蛋白区底色脱净为止，可得到色带清晰的 电泳图谱。 6．透明：将脱色后干燥的电泳图谱膜条放入透明液中浸泡 2～3分钟后取出平铺在玻璃板上,用一直径0.5cm 的玻璃棒将其间的气泡赶出,两者之间不能有泡。 干燥后此透明薄膜,区带着色清晰,可用于光吸收扫 描,长期保存不褪色。;思考题：;;一、实验目的;二、实验原理;茚三酮反应;黄色反应;乙醛酸反应;三、仪器、材料和试剂;四、操作步骤与方法 ;茚三酮反应实验操作;黄色反应实验操作;乙醛酸反应实验操作;五、思考题：;;一、实验目的;二、实验原理;;三、仪器、材料和试剂;四、操作步骤与方法 ;;;