生物化学试 验基础教材编辑.pptVIP

生 物 化 学 实 验;2 通过生物化学实验主要做到;3 实验记录; 1)生物化学实验不同于化学和生物学实验，而有其独特的实验技能和基本操作。课前必须认真预习，明确实验目的、原理、操作关键步骤及注意事项。 2)要十分注意实验安全，未经实验指导老师允许不得开、关任何电源和仪器设备开关（按钮）。 3)实验时应本着认真、积极的态度，在教师的指导下完成每次实验。注意观察实验过程中出现的现象和结果，并对实验结果展开讨论。结果不良时，必须重做。 4)实验中，听从老师指导，严格遵守操作规程，取用试剂时，应仔细辨明标签，以免取错。取完试剂后，应及时将瓶盖盖好，放回原处，切忌乱拿乱放，“张冠李戴”。并应及时将实验结果和原始数据如实记录在实验报告上，按时写出实验报告。 5)实验后，必须把仪器洗净放入仪器柜内；清扫实验台面、地面；试剂瓶要摆放整齐。要经常保持实验室内清洁，不乱丢纸屑及所有固体废弃物。 6)自觉遵守课堂纪律，不迟到早退；保持室内安静；不高声谈笑。同学间应互助友爱。 ;5 实验须知;6 实验报告;第二节 紫外-可见分光光度计的使用原理和方法;目视比色法回顾;常用的目视比色法;常用的目视比色法;1)紫外-可见分光光度法(UV-VIS) ;紫外光：远紫外光（10-200 nm）和近紫外光（200-400 nm）的电磁辐射。 可见光：400-800 nm的电磁辐射。溶液中物质选择性的吸收可见光中某种颜色的光，溶液就会呈现出一定的颜色。 比色分析法：比较有色物质溶液颜色深浅来确定物质含量的方法。 分光光度法：使用分光光度计进行吸收光谱分析的方法。;2)紫外-可见分光光度法的特点： ;3) 紫外-可见吸收光谱; 通过测定被测物质对不同波长的光的吸收强度（吸光度），以波长为横坐标，吸光度为纵坐标作图，得出该物质在测定波长范围的吸收曲线。 在吸收曲线中，通常选用最大吸收波长λmax进行物质含量的测定。 ; 吸收光谱（吸收曲线）： 不同波长光对样品作用不同，吸收强度不同 以λ~A作图 吸收光谱特征：定性依据 吸收峰→λmax 吸收谷→λmin 肩峰→λsh ;图示;吸收曲线的讨论： （1）一种吸光物质对不同波长的光吸收程度不同。吸光度最大处对应的波长称为最大吸收波长λmax 。 吸收曲线是定量分析中选择入射光波长的重要依据。 （2）同一种物质浓度不同，其吸收曲线形状相似λmax不变。 在λmax处，吸光度A正比于浓度C 测定最灵敏 （3）吸收曲线可以提供物质的结构信息，并作为物质定性分析的依据之一。;4) 影响紫外-可见吸收光谱的因素;溶剂 注意如下几点： （1）尽量选用低极性溶剂； （2）能很好地溶解被测物，并且形成的溶液具有良好的化学和光化学稳定性； （3）溶剂在样品的吸收光谱区无明显吸收。 ;5 )紫外-可见吸收光谱的应用 ;2.2 朗伯-比尔定律;溶液的吸光定律;吸光度: 为透光度倒数的对数，用A表示A=lg1/T=-lgT=lgI0/It ;朗伯-比尔定律 朗伯-比尔定律：当一束平行单色光通过含有吸光物质的稀溶液时，溶液的吸光度与吸光物质浓度、液层厚度乘积成正比，即 A= kc l 式中比例常数k(吸光系数)与吸光物质的本性、入射光波长(单色光纯度)及温度等因素有关。c为吸光物质浓度，l为透光液层厚度。 ;偏离朗伯-比耳定律的因素;2.3 紫外-可见分光光度计;光源;;0.575;光源： 用于提供足够强度和稳定的连续光谱。分光光度计中常用的光源有热辐射光源和气体放电光源两类。 热辐射光源用于可见光区，如钨丝灯和卤钨灯,钨灯和碘钨灯可使用的范围在350 ~ 2500 nm； 气体放电光源用于紫外光区，如氢灯和氘灯。;光源：提供符合要求的入射光。 要求：在整个紫外光区或可见光谱区可以发射连续光谱， 具有足够的辐射强度、较好的稳定性、较长的使用寿命。;氘灯; 单色器的主要组成：入射狭缝、出射狭缝、色散元件和准直镜等部分。 ; 吸收池又称比色皿或比色杯，按材料可分为玻璃吸收池和石英吸收池，前者不能用于紫外区。 ;4 检测器 检测器的作用是检测光信号，将光信号转变为电信号并予以放大。现今使用的分光光度计大多采用光电管或光电倍增管作为检测器。;比色法的定量方法： ①标准曲线法: 将一系列浓度不同的标准溶液按照一定操作过程显色后，分别测吸光度(A)，以A为纵