生物制药工 艺学 灭菌技术及微生物发酵的操作方式教材编辑.pptVIP

生物制药工艺学;1、由于杂菌的污染，使生物反应中的基质或产物因杂菌的消耗而损失，造成生产能力的下降； 2、由于杂菌所产生的一些代谢产物，或在染菌后改变了培养液的某些理化性质，使产物的提取和分离变得困难，造成收率降低或使产品的质量下降； 3、杂菌会大量繁殖，会改变反应介质的pH值，从而使生物反应发生异常变化； 4、杂菌可能会分解产物，从而使生产过程失败； 5、发生噬菌体污染，微生物细胞被裂解，而使生产失败，等等;设备无死角，没有构成染菌可能的因素 对生产环境和培养基进行严格的消毒和灭菌 好氧发酵过程应通入无菌空气。 ;*;注意： 在工业生产中, 为了保证纯种培养, 在生产菌种接种之前, 要对培养基、消泡剂、流加物料、空气系统、设备、管道等进行灭菌, 还要对生产环境进行消毒, 防止杂菌和噬菌体的大量繁殖。;化学物质灭菌 辐射灭菌 过滤介质灭菌 热灭菌，包括干热灭菌和湿热灭菌 ;原理：某些化学药剂能与与微生物细胞中的成分反应，使蛋白质变性、酶失活。 常用的灭菌剂：新洁尔灭（苯扎溴铵）、杜灭芬、高锰酸钾、漂白粉、酒精、甲醛、戊二醛、过氧乙酸等。 使用范围：器皿、双手以及实验室、无菌室的环境灭菌，不能用于培养基灭菌。;原理：利用高能量的电磁辐射与菌体核酸的光化学反应造成菌体死亡。 常用：紫外线、X射线和γ射线。（波长在260nm左右的紫外线灭菌效果最高） 紫外线：对微生物有高度致死效应，主要是与菌体核酸的光化学反应 而造成菌体死亡。对营养细胞和芽孢均有效。但穿透力低，只适于表 面灭菌。X射线和γ射线:使菌体内的水和有机物产生强烈的离子化反 应，阻碍微生物代谢活动而导致菌体迅速死亡。虽然灭菌效果好，但 穿透力强，不安全不经济。 使用范围：用于室内空气及器皿表面灭菌。对固体物料灭菌不彻底, 也不能用于液体物料的灭菌。;原理：利用微生物不能透过滤膜除菌。 方法： 0.01-0.45um孔径滤膜 使用范围：用于压缩空气、酶溶液及其他不耐热化合物溶液除菌。工业上常用过滤法大量制备无菌空气, 供好氧微生物 培养过程使用。 ;原理：利用高温??微生物有氧化作用，蛋白质变性和电解质浓缩作用而杀灭微生物。 常用方法：灼烧和电热箱加热，140-180℃ 1-2小时。 使用范围：玻璃及金属用具及沙土管灭菌 。 ;包括巴氏灭菌、间歇灭菌、高压蒸汽灭菌 原理：蒸汽冷凝放出大量潜热，具有穿透力，且在高温有水分条件下，蛋白质易变性而使微生物死亡。 常用方法：水煮常压灭菌 100℃ 饱和蒸汽灭菌 一般121℃ 30min 使用范围：培养基和发酵设备灭菌。;接种针、试管口 环境空气、皮肤表面 无菌室、接种箱 培养基的灭菌 空气;（一）分批灭菌（实罐灭菌） 培养基的分批灭菌就是将配制好的培养基放在发酵罐或其它装置中，通入蒸汽将培养基和所用设备一起进行灭菌的操作过程，也称实罐灭菌。 这种方法不需要其他的附属设备，操作简便，是国内外生产中常用的方法。 但加热和冷却时间较长，营养成分有一定的损失，罐利用率低，不能采用高温快速灭菌工艺;; 从以上分析可知，灭菌过程中加热和保温阶段的灭菌作用是主要的，而冷却阶段的灭菌作用是次要的，一般很小，可以忽略不计。 此外，还应指出的是，应当避免长时间的加热阶段，因为加热时间过长，不仅破坏营养物质，而且也有可能引起培养液中某些有害物质的生成，从而影响培养过程的顺利进行。 ;在实际生产中，也可能遇到所供蒸汽不足、温度不够高的情况，这时可以适当延长灭菌时间。 生产上甚至有用100℃蒸煮而达到彻底灭菌的实例。 如要做固体曲而没有高温蒸汽时，可将原料用100蒸汽蒸30min，杀死其中的营养细胞， 但孢子与细菌的芽孢没有被杀死。 将蒸过的原料置于室温下过夜， 未被杀死的孢子便发芽生长，芽孢发育成营养细胞，再30min便可杀死。如此连续反复进行2-3次，亦可达到彻底灭菌的目的。 ;优点：无需专一灭菌设备，但易发生局部过热而破坏营养成分的现象。 适用条件：当培养基中含有固体颗粒或培养基有较多泡沫时，以采用分批灭菌为好。对于容积小的发酵罐，连续灭菌的优点不明显，而采用分批灭菌比较方便。;（二）连续灭菌 培养基在发酵罐外经过一套灭菌设备连续的加热灭菌，冷却后送入已灭菌的发酵罐的工艺过程。 　特点： 　　1.迅速，损失少。 　　2.发酵罐非生产占用时间少，容积利用率高。 　　3.自动化，热能利用率合理。 　　4.不适用于粘度大和固形物含量高的培养基。 　　 ;*;发酵罐;间歇灭菌与连续灭菌的比较 ;(1) 培养基成分 油脂、糖类及一定浓度的蛋白质增加微生物的耐热性, 高浓度有机物会包于细胞的周围形成一层薄膜, 影响热的传递, 因此在固形