生物制药技 术课程设计.pptVIP

第三章 生物制药的基本技术 Chapter 3 Basic Technique For Biopharmacon ;1、提取法(Extraction) 2、发酵法（ Zymotechnics） 3、化学合成（Chemical synthesize） 4、组织培养法（Tissue culture） 5、现代生物技术(Modern Biotechnics): Gene engineering, Enzyme engineering, Cell engineering , protein Engineering, Fermentation engineering;生化制药的六个阶段 1. 原料的选择和预处理 2. 原料的粉碎 3. 提取：从原料中经溶剂分离有效成分，制成粗品的工 艺过程。 4. 纯化：粗制品经盐析、有机溶剂沉淀、吸附、层析、 透析、超离心 、膜分离、结晶等步骤进行精制的工艺 过程。 5. 浓缩、干燥及保存 6. 制剂：原料药（精制品）经精细加工制成片剂、针 剂、冻干剂、粉剂等供临床应用的各种剂型。; 一. Raw Material Selecting and Pretreatment 原料选择和预处理;二、原料的粉碎Comminution of Raw Material;1.机械法：组织捣碎机、匀浆器、研钵、球磨机、万能粉碎机、绞肉机、击碎机、刨片机。 动物组织多在冰冻状态绞碎、溶浆。 2.物理法 A、反复冻融法：把待破碎的样品冷至-20℃-15℃ ，使 之凝固，然后缓慢的溶解，如此反复操作，大部分动物性 细胞及细胞内的颗粒可以破碎。 B、冷热交替法：将材料投入沸水中，在90℃左右维持数 分钟，立即置于冰浴中，使之迅速冷却，绝大部分细胞 被破坏。此法多用于细菌或病毒中提取蛋白和核酸。 ; C、超声波处理法：多用于微生物材料，处理的效果与 样品浓度、使用频率有 关。用大肠杆菌制备各种酶 时，常用50~100mg/L菌体浓度，在1~10KC频率下 处理10~15min。操作时注意避免溶液中气泡的存在。 D、加压破碎法：加气压或水压，达0.59~34.32MPa (210~350kgf/cm2)的压力时， 可使90%以上细胞被 压碎。多用于微生物酶制剂的工业制备。;3. 生化及化学法： A. 自溶法：将新鲜的生物材料存放在一定的pH和适当温度下，利用组织细胞中自身的酶系将细胞破坏，使细胞内含物释放出来的方法。自溶的温度，动物材料在0-4℃ ，微生物在室温下。自溶时，需加少量的防腐剂，甲???、氯仿，以防止外界细菌的污染。 * 由于自溶时间较长，不易控制，故制造具有活性的核酸和蛋白质时比较少用。 ;B. 溶菌酶处理法：溶菌酶是专一地破坏细菌细胞壁的酶。多用于微生物，对蜗牛酶、纤维酶及植物细胞也适用。如用噬菌体感染大肠杆菌细胞制造DNA时，采用pH8.0的0.1mol/L Tris-0.01mol/L EDTA 制成 2 亿/ml的细胞悬液，然后加 入100μg~1mg的溶菌酶，在37 °C保温10min，细菌胞壁即被破坏。 C. 表面活性剂处理法：表面活性剂的分子中，兼有亲脂性和亲水性基团，能降低水的界面张力，具有乳化、分散、增溶作用。常用有：SDS、氯化十二烷基吡啶、去氧胆酸钠。; 三、提 取 Extraction;3、温度：一般在5 ℃ 以下，但对温度耐受力较大的药物，可适当的提高温度，使杂蛋白变性分离，有利于提取和纯化。如胃蛋白酶、酵母醇脱氢酶及多肽激素类，选择37-50 ℃ 提取，效果较好。 影响提取的因素： 1、被提取物质溶解度的大小：一般极性对极性；非极性对非极性；酸对碱；碱对酸；高温；远离等电点。 2、扩散作用的影响：扩散方程式 G=DF*ΔC/ΔX*t 3、分配作用的影响：分配定律 (C1/C2)恒温、恒压=K;四、分离纯化Separation and Purification;盐析时应注意的几个问题： （1）盐饱和度：由于蛋白质的结构和性质不同，盐析要求的饱和度也不同。要按工艺要求，正确计算饱和度。 （2）pH 值的选择：蛋白质在pI时的溶解度最小。因此，进行盐析时的pH，要选择在被分离蛋白质的pI 附近。 （3）蛋白质浓度：在相同条件下，蛋白质浓度越大越易沉淀，使用盐的饱和度极限也愈低。蛋白质浓度愈高，其他蛋白质共