课件：组织病理学制片技术.ppt

（三）注意事项 1. 液氮速冻时，标本盒不能直接浸入液氮，以免组织膨胀破碎。 2. 速冻的包埋剂应适量。 3. 新鲜组织不能放入-10℃冰箱内缓慢冷却，否则组织内水分可逐渐析出形成冰晶，造成组织结构破坏。 4. 冷冻后的组织块应密封保存，防止失水。 5. 在组织块复温时，应在37℃加温速融，自然复温将造成组织结构破坏。 第四节 脱落细胞制片技术Preparation of Exfoliative cytologic samples 脱落细胞标本包括：胸水、腹水、尿液、脑脊液穿刺液和一些涂片、刷片及印片的细胞，在临床上具有非常重要的诊断价值。 一、细胞标本的取材 细胞标本取材和制片方法一般有印片法、穿刺法、沉淀法和活细胞标本的制备等。 (一)印片法 常用于活检和手术标本，新鲜标本沿病灶中心剖开，将载片轻压于切面上，吹干后立即浸入固定液内5~l0min，取出自然干燥，低温储存。优点是操作简单，细胞抗原保存好。 (二)穿刺液沉淀法 常用于淋巴结、软组织、肝、肾和肺等，穿剌液少，可直接涂片，细胞尽量涂均匀。穿刺液多，细胞丰富，可置离心管内，以500rpm低速离心5~l0min，弃上清，将沉淀制成细胞悬液(2×105细胞/ml)。 涂片镜检, 以细胞较密不重叠为好。干燥后固定。胸水、腹水、尿液和脑脊液等如细胞较少时，也可用此方法制片。此法细胞保存好，操作简单。注意涂片时，尽量涂均匀。 (三)单核细胞分离法 主要用于外周血和胸腹水中淋巴细胞的分离。如为血性胸腹水，经上述方法分离淋巴细胞然后在37℃培养30min，离心沉淀取上清，制成浓度为2×106细胞/ml的细胞悬液，吸50μl涂片，略干后固定l0min。 * * 宫颈脱落细胞涂片 见分化不良细胞体积大、核深染；正常上皮细胞核小、胞浆丰富。 二、血涂片的制作 血涂片的显微检查是血液细胞学检查的基本方法，临床上应用极为广泛，制备厚薄适宜、分布均匀、染色良好的血涂片是血液学检查的基本技术之一。 (一)操作步骤 1. 消毒：先按摩取血部位，使血流通畅；再用酒精消毒采血针和取血部位(如指尖)。 2. 取血：待酒精干后，刺破皮肤，使血自然流出，勿挤。取干净载片，让血滴在离载片一端中4~5mm处，注意手指持握载片的边缘，勿触及其表面。不能使载片接触取血部位的皮肤。 3. 推片：取一张边缘光滑的载片。将其一端置于血滴前方，向后移动到接触血滴，使血液均匀分散在推片与载片的接触处。然后使推片与载片呈30°~40°角，向另一端平稳地推出。涂片推好后，通过摇摆使之快速干燥。 4. 染色：用特种玻璃铅笔在血膜两侧画两条线，防止染液外溢。再将瑞氏染液(伊红-亚甲基蓝)滴在血膜上，至染液淹没全部血膜，染半分钟。加等量蒸馏水(或缓冲液)与染液混合再染5分钟。最后用蒸馏水把染液冲掉，用吸水纸吸干，自然干燥后，即可观察。 （二）注意事项 活细胞标本制备中玻片的清洗：新玻片常有游离碱,因此应用清洗液或10%盐酸浸泡24h,然后再彻底清洗。用过的玻片可放入适量肥皂水或合成洗涤剂的清水中煮沸20min,再用热水将肥皂和血膜洗去，用自来水反复冲洗,必要时再置95%乙醇中浸泡1h，然后擦干或烤干备用。一张良好的血片，要求厚薄适宜，头体尾分明，分布均匀，边缘整齐，两侧留有空隙。血片制好后最好立即固定染色，以免细胞溶解和发生退行性变。 三、活细胞标本的制备 多用于科研，用于常规病理诊断的较少。标本主要来源于建株的培养细胞，短期培养细胞和外周血等。细胞可直接培养在盖玻片上，固定后即可进行染色观察或进行免疫组织化学染色或扫描电镜标本制备。也可培养于培养瓶或培养板内，制成细胞悬液，收集一定的细胞还可进行涂片。可以经离心后，进行透射电镜标本制备。 谢谢大家！ * * 脱落细胞学 检查 采集病变处脱落细胞固定、涂片染色后进行观察。如：子宫颈癌、食管癌、鼻咽癌—直接采集，肺癌—自然分泌物(痰) 7.图象分析技术 病理学形态观察的一种更为精确的定量标准和方法。主要应用于核形态参数的测定(如核直径、周长、面积、体积、形态因子等)。 也用于区别肿瘤的良恶性、区别癌前病变和癌、肿瘤的组织病理分级和判断预后等。 还可用于DNA倍体的测定和显色反应(如免疫组织化学)的定量等方面。 * * * * 3、组织化学和细胞化学的观察： 一般称为特殊染色，通过应用某些能与组织细胞化学成分特异性结合的显色试剂，显示病变组织细胞的化学成分(如蛋白质、核酸、脂类、糖类等)。 4、免疫组织化学观察： 利用抗原与抗体的特异性结合反应来检测组织中未知的抗原或抗体，借以判断肿瘤的组织来源与分化方向。 THANK YOU SUCCESS * * 可编辑 * 三、脱水(Dehydration) 组