甲减大鼠心肌损伤及GPx、SOD、Na+，K+-ATPase基因水平的实验研究-内科学专业论文.docxVIP

中文摘要甲减大鼠心肌损伤及GPx、SOD、Na+．K+．ATPase 中文摘要 甲减大鼠心肌损伤及GPx、SOD、Na+．K+．ATPase 基因水平的实验研究 摘 要 目的： 1观察甲减Wistar大鼠心肌代表抗氧化能力的酶谷胱甘肽过 氧化物酶(GPx)、超氧化物歧化酶(SOD)的组织学水平， 以及过氧化损伤致组织中丙二醛(MDA)及心肌细胞膜 Na+，K*-ATP酶水平的变化。 2观察甲减大鼠心肌GPx、SOD、№+，K+一ATP酶a．亚基 mRNA的基因表达水平。 方法：本研究在成功复制甲状腺功能减退症(甲减)动 物模型的基础上，利用生物化学、分子生物学RT-PCR方法， 系统观察了甲减大鼠心肌过氧化损伤的相关酶学变化。本研 究共分四部分： l甲减动物模型的复制：选用健康断乳一个月，体重在 120．1409的Wistar大鼠，雌雄各半，随机分为甲减组(HYPO) 和甲功正常组既对照组(Eu)，每组10只。HYPO组动物饲 以低碘地区的粮食(玉米、小麦、黄豆)制成的低碘饲料并 添加动物必需的无机盐和维生素，平均碘含量小于5099／kg， EU组饲以正常鼠料，上述两种饲料中各种粮食的配比是相 同的，以保证饲料的主要营养素相同，只是碘含量不同： HYPO组饮用去离子水(水中碘含量为099／L)，EU组饮用 自来水。饲养24周。 2血清学测定：分别留取两组动物的不抗凝全血4ml，离心， 中文摘要吸取血清约2ml，利用竞争结合放射免疫分析方法测定血清 中文摘要 吸取血清约2ml，利用竞争结合放射免疫分析方法测定血清 TT3、TT4、FT3、FT4的水平。 3甲减大鼠一厶肌氧化损伤相关酶学的组织水平测定：上述大 鼠饲养24周，取左室心肌组织匀浆，利用生物化学的方法 分别测定心肌组织中谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)、超氧化物 歧化酶(SOD)、Na+，K+-ATP酶的活性及过氧化产物丙二醛 (MDA)的含量。 4甲减大鼠心肌氧化损伤相关酶学的基因表达：取．80℃保存 的新鲜心肌组织，利用Trizol一步法提取总RNA，再逆转 成cDNA，应用RT-PCR的方法分别扩增目的基因GPx、SOD 及Na+，K+-ATP酶a l亚基，利用管家基因0．actin作为内参 照，1％琼脂糖凝胶电泳后应用MIAS．5．0进行灰度测量，结 果取目的基因与内参照的比值进行半定量分析。 结果： l甲减组TT3、TT4、FT3、FT4均明显下降(po．01)。提示 同一种动物通过食用含碘量很低的饲料及饮用水，可致甲状 腺功能减退，故低碘饮食使甲减动物模型复制成功。 2与甲功正常组相比，甲减组动物心肌组织中GPx活性显著 升高(P0．05)，SOD活性显著下降(PO．05)，Na+，K+一ATP酶活 性明显下降(PO．05)，MDA含量显著增加(P0．05)。结果 示在甲状腺功能减退症的动物心肌中，尽管GPx升高以抵消 过多的自由基，但SOD的下降超过GPx代偿性的升高作用， 导致过氧化产物MDA升高，同时致心肌细胞膜Na+，K十一ATP 酶功能的下降，造成心肌的过氧化损伤。 3与甲功正常组相比，甲减组动物心肌组织中GPx的基因表 达水平显著升高(P0．05)，SOD表达水平略下降，但无统计 奎 中文摘要学意义， 中文摘要 学意义， Na+，K+一ATP酶Q 1亚基的基因表达水平明显下降 (P0．05)。上述与组织水平上相似的结果进一步在分子水平 上证实了甲减组动物心肌存在过氧化损伤。 结论： 1碘不足导致Wistar大鼠甲状腺功能减低。 2甲减大鼠心肌GPx酶活性代偿性升高，SOD酶活性下降， N-a+，K+．ATP酶活性下降，过氧化产物MDA含量升高。 3甲减大鼠心肌GPx．mRNA表达增强，SOD。mRNA表达减 少，Na+，K+．ATP酶Q l亚基一mRNA表达下降。 4甲减心肌损伤的机制可能与心肌的过氧化损伤加重有关。 关键词：Wistar大鼠；甲减；心肌；过氧化损伤；RT-PCR 荚文摘要A 荚文摘要 A Study on rat myocardial damage and the gene expression level of GPx、SOD、Na+．K+．ATPase in hypothyroid state ABSTRACT ubjective： 1 The research observed the histology level of GSH—PX (glutathione peroxidase)、SOD(superoxide dismutase)and the major medium production of lipid peroxidation MDA(malondialdehyde)and activity of Na+，K+