质粒DNA的提取、定量、PCR鉴定.pptVIP

PCR相关技术 PCR相关技术 荧光定量PCR（real-time PCR） PCR相关技术 质粒提取方法 方法：碱裂解法 煮沸裂解 羟基磷灰石柱层析法 酸酚法等。 概括起来主要是用非离子型或离子型去污剂、有机溶剂或碱进行处理及用加热处理 选择哪一种方法主要取决于以下几个因素： 质粒的大小 大肠杆菌菌株 裂解后用于纯化的技术和实验要求 基本步骤 所有分离质粒DNA的方法都包括3个基本步骤： 1)培养细菌使质粒扩增 2)收集和裂解细菌 3)分离、纯化质粒DNA 2、离心层析柱 质粒定量检测 紫外分光光度计法 根据在260nm以及在280nm的读数比值（ A260/280 =OD260/OD280）估计核酸的纯度 注意事项 * 每种核酸的分子构成不一，因此其换算系数不同。定量不同类型的核酸，事先要选择对应的系数。如：1OD的吸光值分别相当于50μg/ml的dsDNA，37μg/ml的ssDNA，40μg/ml的RNA，30μg/ml的Olig。测试后的吸光值经过上述系数的换算，从而得出相应的样品浓度。测试前，选择正确的程序，输入原液和稀释液的体积，尔后测试空白液和样品液。 * * * * * * * * * * PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光