磺胺类抗生素与群体感应抑制剂对费氏弧菌的联合毒性及机制初探-环境科学与工程专业论文.docxVIP

上海海 上海海洋大学硕士学位论文 万方数据 万方数据 上海海洋大学 博/硕士学位论文 答辩委员会成员名单 姓名 工作单位 职称 备注 郭卫民 上海交通大学 副研究员 主席 方淑波 上海海洋大学 副教授 委员 贾睿 上海海洋大学 副教授 委员 委员 委员 委员 委员 杨静 上海海洋大学 工程师 秘书 答辩地点 海洋学院 A323 答辩日期 2015.6.5 磺胺类抗生素与群体感应抑制剂对费氏弧菌的联合毒性及机 制初探 摘 要 抗生素自发现以来，因其惊人的抗菌能力，被广泛用于农业、渔业、畜牧业 等领域。但是由于其大规模无节制的使用，诱导了抗性基因的产生，引发了一系 列环境问题。为有效解决抗生素滥用而导致的抗性基因问题，群体感应抑制剂作 为最为可能的抗生素替代品被提出。可见，抗生素与群体感应抑制剂在未来将不 可避免的长期共存于环境中。因此，研究抗生素与群体感应抑制剂的慢性联合毒 性，开展它们低剂量下是否存在刺激微生物生长（hormesis 效应）的工作，为相关 生态环境风险评价甚至医学联合用药提供理论依据，具有重要的科学意义。 本文选取了 12 种磺胺类抗生素及三类群体感应抑制剂，以费氏弧菌为模式生 物，分别测定了其 15min 急性单一毒性、15min 急性混合毒性、24h 慢性单一毒性、 24h 慢性混合毒性及 24h 慢性单一 hormesis、24h 慢性混合 hormesis 现象。通过 化合物理化参数的计算、相关蛋白的同源建模、分子对接及细菌体内吲哚实验的 测定，初步探讨了磺胺类抗生素与群体感应抑制剂的急慢性联合毒性作用机制及 hormesis 现象产生的原因。研究结果如下： （1）呋喃酮类化合物与磺胺类抗生素的二元等毒性比下的急性联合效应表现 为协同与加和，吡咯酮类、吡咯类化合物与磺胺类抗生素的二元等毒性比下的急 性联合效应分别表现为加和与拮抗。群体感应抑制剂的最正氢电荷的值的大小可 能是其急性联合作用机制不同的原因。 （2）三类群体感应抑制剂与磺胺类抗生素对费氏弧菌的慢性联合作用都表现 为拮抗作用。推测其原因可能是磺胺类抗生素促进了细菌体内的 LuxR 蛋白的表达， 而群体感应抑制剂与细菌产生的信号分子竞争结合 LuxR 蛋白，导致了慢性的拮抗。 （3）12 种磺胺在低剂量时会刺激费氏弧菌光值增大，产生 hormesis 效应。原 因是其促进了细菌体内 LuxR 蛋白的表达，而 LuxR 蛋白是细菌发光的主要调控蛋 白。通过细菌生长过程中吲哚的测定，推断吲哚并不是导致费氏弧菌 LuxR 蛋白表 达量增加的物质，因此，hormesis 现象产生的机制有待进一步的研究。 I （4）本研究具有 hormesis 效应的两种化合物混合后 hormesis 效应依然明显。 用 hormesis 效应曲线与 Y=0 的直线所围成的闭合区间面积来评价 hormesis 效应。 用 Brain-Cousens 模型将 hormesis 剂量-效应曲线拟合并计算闭合区间面积，建立 单一 hormesis 面积与混合 hormesis 面积的相关关系方程，所建方程 R2 均大于 0.64， 说明该方程具有统计学意义，可用于混合 hormesis 效应的预测。 关键词：抗生素，群体感应抑制剂，费氏弧菌，联合毒性，毒物兴奋效应 II Joint Effects and Mechanisms of Binary Toxicity of Sulfa Antibiotics and Quorum Sensing Inhibitors to Vibrio Fischeri ABSTRACT Because of their antibacterial ability, antibiotics were widely used in agriculture, fisheries, animal husbandry and other fields since they were found. Due to the overuse of excess, resistance gene and a serious environment problem emerged. Quorum sensing inhibitors as antibiotic alternatives had been proposed to solve the problem of antibiotics abuse. Inevitably, both of them will coexist in environment for a long time in the future. So the research of joint effects of antibiotics