微生物的培养与应用--课件.pptxVIP

;高考考法突破;应试基础必备;(3)实验操作 ①制备固体培养基 a．步骤：计算→称量→溶化→灭菌→倒平板。 b．倒平板操作时待培养基冷却至50 ℃左右时，在酒精灯火焰附近倒平板。 ②纯化菌种 a．原理：在培养基上将细菌稀释或分散成单个细胞，使其长成单个菌落，这个菌落就是一个纯化的细菌菌落。 b．方法：平板划线法、稀释涂布平板法。 ③菌种的保藏 a．临时保存：固体斜面培养基上4 ℃保存，菌种易被污染或产生变异。 b．甘油保存：甘油瓶中－20 ℃冷冻箱中保藏。 ;;②间接计数法(活菌计数法) A．原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数就能推测出样品中大约含有多少活菌。 B．计算公式：每克样品中的菌株数＝(C÷V)×M，其中C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)，M代表稀释倍数。 C．操作 a．设置重复组，增强实验的说服力与准确性。 b．为了保证结果准确，一般选择菌落数在30～300的平板进行计数。 (3)实验流程：土壤取样→制备培养基→微生物的培养与观察→细菌的计数。;3．培养基对微生物的选择作用 (1)纤维素酶 纤维素酶是一种复合酶，它包括C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶，具有催化分解纤维素的作用，其作用过程如下： ;高考考法突破;(2)培养基的分类;(3)培养基的配制原则;;;; ［课标全国Ⅲ理综2016·39，15分］某同学用新鲜的泡菜滤液为实验材料分离纯化乳酸菌。分离纯化所用固体培养基中因含有碳酸钙而不透明，乳酸菌产生的乳酸能溶解培养基中的碳酸钙。回答下列问题： （1）分离纯化乳酸菌时，首先需要用 对泡菜滤液进行梯度稀释，进行梯度稀释的理由是 。 （2）推测在分离纯化所用的培养基中加入碳酸钙的作用有 和 。分离纯化时应挑选出 的菌落作为候选菌。 （3）乳酸菌在-20 ℃长期保存时，菌液中常需要加入一定量的 （填“蒸馏水”“甘油”或“碳酸钙”）。;【解析】 （1）分离纯化乳酸菌需采用稀释涂布平板法，在稀释度足够高的菌液中，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而在培养基上形成单菌落。为避免引入杂菌，必须用无菌水进行稀释。 （2）据题意可知，只有乳酸菌能产生乳酸溶解碳酸钙，加入碳酸钙的培养基可作为鉴别培养基，便于对乳酸菌进行筛选鉴定；此外，加入碳酸钙也可中和产生的酸，有利于乳酸菌的生存。 （3）细胞冷冻保存时，加入保护剂甘油可使冰点降低，在缓慢的冻结条件下，能使细胞内水分在冻结前透出细胞外，可避免因细胞的机械损伤、电解质升高、渗透压改变、脱水、pH改变、蛋白质变性等因素导致细胞死亡。 【答案】 （1）无菌水泡菜滤液中菌的浓度高，直接培养很难分离得到单菌落 （2）鉴别乳酸菌中和产生的乳酸（或酸） 具有透明圈 （3）甘油;考法2 微生物的分离、筛选与计数;;（2）菌株筛选原理的比较;（1）直接计数法——常用的是显微镜直接计数法。但不能区分死细胞与活细胞，应用范围狭窄，难以计数微小的细菌。 （2）间接计数法 ①原理：常用稀释涂布平板计数法，当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。 ②操作：实验时，每一浓度至少涂布3个平板，以增强实验的说服力和准确性。 ③计数规则：选择菌落数在30～300间的平板进行计数。 ④计算方法：每克样品中的菌株数=(C÷V)×M，其中C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数， V代表涂布平板时所用的稀释液的体积（mL），M代表稀释倍数。;;【解析】 （1）题中要从土壤中分离出产脲酶细菌，所用的选择培养基应以尿素为唯一氮源，要鉴别尿素分解菌，可在培养基中加入酚红指示剂，产脲酶细菌在该培养基上生长一段时间，由于产生的脲酶分解了尿素，产生氨，使培养基pH升高，所以菌落周围的指示剂变成红色。 （2）依据题意“均接种稀释倍数为105的土壤样品溶液0.1 mL，可知该过程采取的接种方法是稀释涂布平板法；根据计算公式：每克样品中菌株数=（C÷V）×M，其中C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板所用的稀释液的体积（mL），M代表稀释倍数，为使结果接近真实值，一般选择菌落数在30~300的平板进行计数，菌落数为13和462的平板应舍弃，所以每克土壤样品中的细菌数量为［（156+178+191）÷3］÷0.1×105=1.75×108个；因为稀释涂布平板法计数过