实时荧光聚合酶链式反应技术快速鉴定仿刺参-食品科学.PDF

※分析检测 食品科学 2014, Vol.35, No.10 145 实时荧光聚合酶链式反应技术快速鉴定仿刺参 1 1 1 2 3 曹际娟 ，徐君怡 ，徐 杨 ，荣 策 ，陈 颖 （1.辽宁出入境检验检疫局，辽宁 大连 116001 ；2.大连工业大学生物工程学院，辽宁 大连 116034 ； 3. 中国检验检疫科学研究院，北京 100123 ） 摘  要：基于仿刺参线粒体COX1基因、NAD4基因分别设计特异性检测引物和探针，采用TaqMan探针实时荧光聚 合酶链式反应（polymerase chain reaction ，PCR ）技术进行仿刺参的特异性鉴定检测。对21 种海参样品进行实时荧 光PCR检测的特异性检验，并对每个样品做3 个平行实验，计算Ct平均值、标准偏差及变异系数，评估检测方法的 重复性。结果表明：所设计的引物和探针可以特异性的鉴别仿刺参，方法的变异系数均小于2% ，表明本研究设计 的引物和探针具有良好的重复性。本研究所建立的快速检测仿刺参的方法快速、简便，既克服了传统海参鉴别方法 的局限性，同时又结合了荧光PCR技术高效率、低污染的优点，为仿刺参真伪鉴别研究提供了有价值的参考意见。 关键词：实时荧光聚合酶链式反应；鉴别；仿刺参 Rapid Identification of Apostichopus japonicas by Real-Time Fluorescence Polymerase Chain Reaction 1 1 1 2 3 CAO Ji-juan , XU Jun-yi , XU Yang , RONG Ce , CHEN Ying (1. Liaoning Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau, Dalian 116001, China; 2. School of Biological Engineering, Dalian Polytechnic University, Dalian 116034, China; 3. Chinese Academy of Inspection and Quarantine, Beijing 100123, China) Abstract: Objective: This study aimed to establish a rapid method for specific identification of Apostichopus japonicas (A. japonicas) by TaqMan® probe real-time polymerase chain reaction (RT-qPCR). Methods: Two sets of specific primers and probes were designed based on the COX1 and NAD4 genes of A. japonicas. Twenty-one sea cucumber samples were detected by RT-qPCR in three parallel repetitions for each sample. The average Ct value, standard deviation and coefficient of variation were calculated to evaluate the repeatability of the