分子生物学幻灯片5.DNA复制.pptVIP

Furthermore , Watson and Crick issued the “Central Dogma” to faithful ,Which decreed that genetic information flows linearly from DNA to RNA to protein, and never in reverse.;DNA;5. DNA复制 DNA Replication  （Duplication）;5.1 DNA复制的特点 The Characteristics of DNA Replication;DNA复制的半保留性 DNA复制的半不连续性 复制起点(ori区，序列十分保守) RNA引物 思考：DNA通过自身复制，怎样维持遗传的稳定，即DNA复制的高度忠实性是怎样实现的？;5.2 参与DNA复制的酶体系  Enzymes and relative  proteins in DNA replication;5.2.1 DNA聚合酶及其功能  DNA polymerase (pol) and its function; 研究最清楚的是大肠杆菌中的DNA聚合酶，已鉴定了5种不同的DNA聚合酶，分别为DNA聚合酶Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ。 所有的原核和真核生物的聚合酶都具有同样的合成行为的基本类型。每一个都可以通过在3‘-OH端一次加入一个核苷延伸DNA链，加入链中的核苷是通过和模版DNA的碱基配对来选择的。;5.2.1.1 DNA聚合酶催化的反应 The catalysis reaction ;5-2;3’-OH自由端的作用 DNA聚合酶需要3’-OH自由端来初始DNA的合成。 提供3’-OH自由端的途径;一个引导点在双链DNA中产生。最常见的机制是通过引入一个切口，如同在初始滚环复制，在这种情况下，事先形成的链由新生成的链替代。 一个蛋白质（C-OH）可以直接引导反应，它可以直接向DNA聚合酶提供一个核苷。这种反应有若干病毒采用。;5.2.2.2 DNA聚合酶Ⅰ  DNA Pol Ⅰ;Klenow片段的结构（右手形状）;复制忠实性 Replicate fidelity ;正确碱基配对 ;Slow or no DNA synthesis（几乎没有DNA合成）;b. Removal of mismatched nucleotides（切除错配碱基）;c. Resume DNA synthesis（修复DNA合成）;5.2.2.3 DNA聚合酶Ⅲ  DNA pol Ⅲ;亚基;(βdimer,滑动夹子); β亚基二聚体构成一个滑动的夹子，夹住DNA分子相对滑动，使聚合酶在完成复制前不脱离模板DNA而持续聚合。; DNA pol Ⅲ复杂的亚基结构使它具有更高的保真性(fidelity)、协同性(cooperativity) 和持续性(processivity)。;长号模型（Trombone model）;;;;;5.2.3 DNA连接酶 DNA ligase;DNA连接酶的催化反应 DNA ligase + NAD+/ATP ↓ 酶-AMP复合物 ↓+DNA AMP-DNA ↓ 相邻3’-OH对活化的磷原子发生亲核攻击 ↓→AMP 3’,5’-磷酸二酯键 ;5.2.4 引物合成酶 Primase;5.2.5 RNA消化酶 RNase ;5.2.6 拓扑异构酶  Topoisomerase ;Topoisomerase;TOPⅡ ： 使松弛型环状DNA转变为负超螺旋DNA， 又称促旋酶。 ; 大肠杆菌中的DNA旋转酶(gyrase)又称拓扑异构酶Ⅱ( Topoisomerase Ⅱ)，由四个亚基组成四聚体α2β2，而真核生物的呈αβ二聚体。;5.2.7 解旋酶和单链结合蛋白 Helicase SSB;DNA 解旋酶(DNA helicase)的作用;SSB结合ssDNA;5.3 原核生物DNA复制（大肠杆菌为例）