医学分子生物学新技术应用课件.ppt

分子生物学新技术及其应用;代谢组学及研究技术 microRNA的研究及应用 免疫共沉淀技术（Co-Immunoprecipitation） 4. 胞内RNA分子可视技术;第一节 代谢组学及其研究进展;代谢组学研究什么？？;体内各种物质代谢过程互相联系形成一个整体 ;机体物质代谢不断受到精细调节; 代谢组(metabolome)是指一个细胞、组织或器官中所有代谢物的集合, 包含一系列不同化学型的分子, 比如肽、碳水化合物、脂类、核酸以及异源物质的催化产物等。 代谢组学(metabonomics／metabolomics)来源于代谢组一词,是研究一个细胞、组织或器官中所有小分子代谢组分集合的科学。代谢组学研究的目的是定量分析一个生物系统内所有代谢物的含量。 ; 代谢组学分析可以指示细胞、组织或器官的生化状态, 协助阐释新基因或未知功能基因的功能, 并且可以揭示生物各代谢网络间的关联性, 帮助人们更系统地认识生物体。进??代谢组学研究涉及生命科学、分析科学以及化学统计学三大方面的专业知识。 代谢物化学分析技术及数据分析技术的发展极大促进了诸多生物、医学问题的研究, 这些知识的综合运用使得代谢组研究在疾病诊断、药理研究以及临床前毒理等研究中发挥了极为重要的作用。;普遍定义;特点;代谢组学的发展;研究方法;应用;连接图数据库 Connections Map DB 京都基因与基因组百科全书 KEGG (http://www.genome.jp/kegg/ligand.html) 生物化学途径 ExPASy 互联网主要代谢途径 main metabolic pathways on Internert, MMP Duke 博士植物化学和民族植物学数据库 Arizona 大学天然数据库 Wiley_handbook of gc-ms 新药及其代谢产物质谱库 http://www.ualberta.ca/_gjones/mslib.htm “肿瘤”代谢组数据库 Pubmed 化合物数据库 NIST质谱数据库 /srd/nistl.htm;代谢组学分析技术;分析技术;质谱仪的基本结构及工作流程 ;几种新的GC-MS技术;研究实例;GC-MS 适用于挥发性的代谢物。对于非挥发性代谢物的分析需要经过化学衍生。 多用于环境分析、大气有毒气体分析、某些疾病诊断等。;2.液相色谱-质谱联用技术（LC-MS） LC工作原理： ;液相色谱-质谱联用的新技术;高效液相色谱系统配合液相质谱系统。健康和慢性乙肝病人的血清样本。;新型液相色谱技术UPLC; 比较（a）HPLC和（b）UPLC用于美沙芬的代谢物TOP质谱全扫描（Rapid Commun Mass Spectrom, 2005, 19, 843）;UPLC在代谢组学中的研究优势;毛细管电泳-质谱联用技术（CE-MS）;毛细管电泳-质谱联用分析仪（兰州理工大学）型号： P/ACE MDQ-Deca XP plus 厂家：美国 Beckan Coulter-Finnigan;（NMR）;核磁共振;hr-MAS of biological tissue;代谢组学研究一般包括四个步骤： 第一步，给予生物体一定的刺激。 第二步，代谢组数据的采集。用核磁共振、质谱、色谱等分析手段测定其中代谢物的种类、含量和状态以及其变化。;microRNA 的研究与应用;10.1.1 概述 10.1.2. microRNA的分子生物学研究方法 10.1.3 microRNA的实验技术 10.1.4 microRNA与疾病 ;概述;概述 · MicroRNA的发现; let-7: Rinhart等人于2000年在线虫发现第二个miRNA， let-7。 let-7在L3,L4阶段大量表达，控制幼虫的L4阶段向成虫阶段发育转换。 ;MicroRNA的起源与生物合成过程;MicroRNA的起源与生物合成过程;miRNA与siRNA的性质比较;;;MicroRNA的鉴定 ;MicroRNA的特征;MicroRNA的功能;miRNA 靶基因 功能作用;miRNA 靶基因 功能作用;MicroRNA的调控机制;MicroRNA表达的研究方法 ;miRNA功能研究的主要实验策略;MicroRNA功能研究方法 ;miRNA基因克隆;Michael MZ, 2006;miRNA基因克隆的基本步骤;miRNA基因克隆的基本步骤;PAGE/Northern blotting;PAGE/Northern blotting基本操作步骤;PAGE/