鸡豆黄素A抑制小胶质细胞炎症介质的释放保护多巴胺能神经元-药理学专业论文.docxVIP

英文缩略词表（Abbreviation）英文缩略词英文全称中文全称Bioch ABiochanin A鸡豆黄素 ACCl4carbon tetrachloride四氯化碳COX-2cyclooxygenase-2环氧化酶-2DAdopamine多巴胺EDTAethylenediamine retra-acetic acid乙二胺四乙酸ELISAenzyme-linked immunosorbent assay酶联免疫吸附法ERestradiol雌二醇ERKextracellular signal-regulated kinase细胞外信号调控激酶FBSfetal bovine serum胎牛血清hhour小时iNOSinducible nitric oxide synthase诱导型一氧化氮合酶IL-1βinterleukin-1β白介素-1βJNKC-jun N-terminal kinase氨基端激酶LPSlipopolysaccharide脂多糖MAPKmitogen-activated protein丝裂原活化蛋白激酶minminute分钟MTT3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetraz四甲基偶氮唑盐olium bromideNOnitric oxide一氧化氮PBSphosphate buffer saline磷酸盐缓冲液PDParkinson disease帕金森病PVDFpolyvinylidene fluoride氟化聚偏乙烯ROSreactive oxygen species活性氧TNF-atumor necrosis factor-a肿瘤坏死因子-a鸡豆黄素 A 抑制小胶质细胞炎症介质的释放保护多巴胺能神经元中文摘要帕金森病（Parkinsons disease，PD）是中老年人常见的中枢神经系统退行性 疾病，临床症状主要表现为静止性震颤、肌肉强直和运动迟缓等。其主要病理特 征为黑质致密部多巴胺（dopamine，DA）能神经元选择性变性、死亡。目前 PD 的病因尚不清楚，最近研究表明，体内雌激素水平与 PD 发病相关，并且小胶质 细胞激活在 PD 病程中有重要作用。鸡豆黄素 A（Bioch A）是鹰嘴豆中一种重要 的异黄酮，其作为一种植物雌激素，发挥着多种生物学功能，但是它在神经退行 性疾病的中的作用尚不明确。目的：观察 Bioch A 对小胶质细胞激活介导的多巴胺能神经元损伤的保护作用及 相关的机制。方法：采用 MTT 法，检测脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）和 Bioch A 对原代 培养的小胶质细胞和 BV-2 细胞的毒性作用，筛选 LPS 的刺激剂量和 Bioch A 的 剂量；在原代培养的小胶质细胞和 BV-2 细胞中， Bioch A（5μM）预处理 30min 后分别加入 1μg/ml LPS 和 10μg/ml LPS 共同孵育 36h，采用 OX42 染色观察小胶 质细胞的形态变化；采用 ELISA 检测法、Griess 法和 DCFH-DA 探针法分别检测 原代培养小胶质细胞上清液中肿瘤坏死因子-a（tumor necrosis factor-a，TNF-a）、 白介素-1β（interleukin 1β，L-1β）、一氧化氮（nitric oxide，NO）、活性氧（reactive oxygen species，ROS）的变化；采用 RT-PCR 法、Western Blot 法分别检测 BV-2 细 胞内 TNF-a、IL-1β、诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase，iNOS) 的基因表达变化和 iNOS，环氧化酶-2（cyclooxygenase-2，COX-2），p-JNK，p-ERK 的表达变化；建立大鼠原代中脑小胶质细胞—神经元混合培养体系，给予 Bioch A（1.25，2.5，5μM）预处理 30min 后用 LPS（10μg/ml）刺激，采用 OX-42 免疫 组 织 化 学 染 色 观 察 小 胶 质 细 胞 的 形 态 变 化 ； 采 用 酪 氨 酸 羟 化 酶 （ tyrosinehydroxylase，TH）免疫组化染色，观察多巴胺能神经元形态和数量变化，分析小胶质细胞活化与多巴胺能神经元退变丢失的关系。结果：1.原代培养小胶质细胞经 LPS 刺激激活后，形态发生显著变化：胞体变大， 形态不规则，胞身有很多短小的突起，类似阿米巴状；BV-2 细胞经 LPS 刺激后 两端的轴突消失变成短小的突起，胞体变大。2. Bioch A（2.5，5μM）减少了活化的小胶质细胞的数量、降低了细胞上清液 中 TNF-a， IL-1β，NO 的含量以及细胞内