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上海交通大学硕士学位论文
上海交通大学硕士学位论文
万方数据
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上海交通大学
学位论文原创性声明
本人郑重声明:所呈交的学位论文,是本人在导师的指导下,独 立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外,本论 文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文 的研究做出重要贡献的个人和集体,均已在文中以明确方式标明。本 人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。
学位论文作者签名
日期:2013 年 5 月 13 日
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上海交通大学
学位论文版权使用授权书
本论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定,同意 学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许 论文被查阅和借阅。本人授权上海交通大学可以将本学位论文的全部 或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或扫描等 复制手段保存和汇编本学位论文。
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不保密√。
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学位论文作者签名: 指导教师签名: 日期:2013 年 5 月 13 日 日期:2013 年 5 月 13 日
VII
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黄单胞菌(Xanthomonas campestris pv. campestris)葡
萄糖转运系统的改造及其应用研究 摘要
葡萄糖是纤维素生物转化过程中重要的中间产物,同时葡萄糖也 是很多微生物的优势碳源。因此,高效地将纤维素转化为葡萄糖将极 大地有利于利用纤维素生产生物燃料。
纤维素的体外酶解过程需要投入大量的商业化的纤维素酶,因此 体外酶解法始终存在着成本过高的问题。构建一种能够直接将纤维素 转化为目的产物的工程菌也是一种策略,但是就目前而言这还是一个 很大的挑战。
将一种能够水解纤维素产生葡萄糖的微生物与另一种能够发酵 葡萄糖产生目的产品的微生物共培养则是一种很有发展前景的方法。 然而,这种方法的总转化率有时会受到影响,因为生产葡萄糖的微生 物本身也会消耗葡萄糖。因此,如果能够阻遏生产葡萄糖的微生物对 于葡萄糖的摄入,那么这将提高共培养发酵的总转化率。
基于这个目的,我们通过同源重组的方法敲除了黄单胞菌中编码 葡萄糖转运蛋白的基因。在营养丰富的 NYG 培养基或者以甘油作为 唯一碳源的基础培养基中培养细菌时,葡萄糖转运蛋白基因的敲除对 于黄单胞菌的生长曲线、胞外多糖产量和纤维素酶水平几乎没有影响。 然而,在以羧甲基纤维素钠作为唯一碳源的基础培养基培养细菌时,
IX
基因敲除菌株比野生菌株胞外积累的葡萄糖量多,这表明对葡萄糖生
产菌株的葡萄糖转运进行阻遏是提高共培养发酵总转化率的有效途 径。
关键词:黄单胞菌,纤维素,葡萄糖,葡萄糖转运蛋白
X
STUDIES AND APPLICATION OF BLOCK OF GLUCOSE TRANSPORTATION SYSYEM IN XANTHOMONAS CAMPESTRIS PV.CAMPESTRIS
ABSTRACT
Glucose, an intermediate of cellulose degradation, is the optimal carbon source for almost all cellular organisms. Therefore, efficient conversation of cellulose into glucose would greatly benefit the production of bio-fuels with cellulose.
It is not economic for this conversation through in vitro enzymatic cleavage with the isolated ?????-glycosidase because large amounts of the commercial enzymes have to be invested. Alternative strategy is to create a novel engineered organism with capability of converting cellulose to the desired products, which has a great challenge at present.
Co-fermentation with two kinds of microbials, one is the strain for glucose production, the other one is for the fermentation of desired products, seems to
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