生物技术药物学实验指导.docVIP

PAGE 生物技术药物学实验指导 徐彬 杨国柱 编写 广东药学院生命科学与生物制药学院 2007年6月 目录 第一部分 生物技术药物概述 1 一 生物药物简介 1 二 生物技术药物的主要品种类型 1 三 生物技术药物的研发 2 四 生物技术药物一般生产过程和质量控制 3 第二部分 实验项目 5 实验一 实验动物的识别、捕捉、标记、给药方式和取血方法 5 实验二 干扰素效价测定（细胞病变抑制法） 14 实验三 重组人EPO的药理作用和体内活性测定（网织红细胞法） 17 实验四 EGF生物学活性测定 21 实验五 促性腺激素类药物的药理学作用观察 23 实验六 尿激酶的药理作用和效价测定 27 纤维蛋白平板法 27 发色底物法 30 实验七 胰岛素的药理作用和生物学测定（小鼠惊厥法） 33 实验八 胰岛素的药理作用和生物学测定（小鼠血糖法） 35 实验九 重组乙型肝炎疫苗的检验 38 重组（酵母）乙型肝炎疫苗的检验 38 重组（CHO细胞）乙型肝炎疫苗的检验 40 实验十 单克隆抗体的制备 42 动物免疫 42 细胞融合 44 杂交瘤细胞筛选 48 杂交瘤细胞的克隆化 56 杂交瘤细胞的冻存与复苏 57 单抗特性的鉴定 59 单克隆抗体的生产 63 单克隆抗体的标记 67 主要参考文献 73 PAGE 72 第一部分 生物技术药物概述 一、生物药物简介 生物药物是集生物学、医学、药学的先进技术为一体，以组合化学、药学基因、功能抗原学、生物信息学等高技术为依托，以分子遗传学、分子生物、生物物理等基础学科的突破为后盾形成的产业，是利用生物体、生物组织及其成分，综合应用生物学、生物化学、微生物学、免疫学、物理化学和现代药学的原理和方法进行加工、制造而成的一大类用于预防、诊断和治疗疾病的制品。 分为4类： 1. 基因工程药物 ：用基因工程和蛋白质工程技术制造的重组活性蛋白、多肽、蛋白多肽类似物或衍生物、抗体、疫苗等等。 2. 基因药物：治疗用的基因，反义核酸和核酶等 3. 天然生化药物：动物、植物、微生物和海洋生物来源的天然生化活性物质 4. 合成或半合成的生物药物 生物技术药物又称基因工程药物，包括上面讲的第一和第二类药物。 二、生物技术药物的主要品种类型 1.干扰素类：IFN-α、IFN-β、IFN-γ。 2. 白介素：IL-2已临床应用，正在研发的有IL-1，3，4，5，6，11，12。 3.肿瘤坏死因子：TNF-α和TNFR。 4. 造血系统生长因子:粒细胞集落刺激因子G-CSF, 巨噬细胞集落刺激因子M-CSF, 巨噬细胞粒细胞集落刺激因子GM-CSF, 促红细胞生成素EPO, 促血小板生成素TPO, 干细胞生长因子SCF。 5. 其他生长因子：胰岛素样生长因子IGF，表皮生长因子EGF, 血小板衍生生长因子PDGF, 转化生长因子TGF-α和TGF-β等。 6. 重组蛋白质与多肽类激素：人重组胰岛素humulin， 人生长激素rhGH, 促卵泡激素FSH, 促黄体生成素LH, 绒毛膜促性腺激素HCG。 7. 治疗用酶：主要为用于心血管疾病治疗的tPA, uPA, 链激酶、葡激酶等和用于肿瘤治疗的葡萄糖脑苷酶。 8.重组疫苗：乙肝疫苗，艾滋病疫苗等。 9. 单抗制品。 10.基因药物：用于基因治疗的目的DNA片段重组物。 三、生物技术药物的研发 很多疾病没有得到彻底的治疗，而且许多新的疾病又在不断的产生，因此开发新药就是必不可少的了。研发新药具有高投入、高风险、高效益和周期长等特点，已经成为世界各国经济和科技竞争的热点，也是促进医药企业不断发展的动力。 新生物制品研制内容包括生产用菌毒种、细胞株、生物组织、生产工艺和产品质量标准、检定方法、保存条件、稳定性以及与制品安全性、有效性有关的免疫学、药理学、毒理学、药代动力学等临床前的研究工作和临床研究。并根据研究结果提出制造检定规程和产品使用说明书。 新生物制品研制过程一般分为以下5个阶段，各阶段的要求如下： 1、实验研究包括应用基础研究，生产用菌毒种或细胞株的构建、选育、培养、遗传稳定性，生物组织选择，有效成分的提取、纯化及其理化特性、生物特性的分析等研究，取得制造和质量检定的基本条件和方法。 2、小量试制根据实验研究结果，确定配方、建立制备工艺和检定方法，试制小批量样品，进行临床前安全性和有效性的实验，并制定制造与检定基本要求。 3、中间试制(1)生产工艺基本定型，产品质量和产率相对稳定，并能放大生产。(2)有产品质量标准、检定方法、保存稳定性资料，并有测定效价用的参考品或对照品。(3)提供自检和中国药品生物制品检定所复检合格，并能满足临床研究用量的连续三批产品。(4)制定较完善的制造检定试行规程和产品使用说明书（草案）。 4、试生产在试生产阶段，完善