鸡骨骼肌卫星细胞分离、培养方法的建立及特性的研究-人机与环境工程专业论文.docxVIP

Classified Index：Q781: 577.21Dissertation for the Master Degree of EngineeringISOLATION, CULTURE AND CHARACTER STUDY OF CHICKEN SKELETAL MUSCLE SATELLITE CELLSCandidate：Chen YanSupervisor：Prof. DahaiAcademic Degree Applied for：Master of ESpecialty：Man-machiengineeringAffiliation:Life sciencDate of Defence：March, 200Degree Conferring Institution：Harbin InstiZhu ngineeringneandenvironmente and Engineering6tute of Technology摘 要骨骼肌是研究发育的很多基本原理的一个理想模型。研究肌肉发生对于理 解胚胎发育的全过程具有重要意义。卫星细胞是一类存在于成体骨骼肌肌纤维基膜和原浆膜间的梭形或纺锤型 细胞。卫星细胞在骨骼肌生长中起关键作用，它调节着出生后的肌肉的生长， 是成体肌肉增长的首要途径。以往的研究结果指出：骨骼肌的修复过程是一个通过活化刺激因子和抑制 因子而保持相对平衡的过程，由此而保证骨骼肌在修复过程中在肌肉大小和位 置的完善。成纤维细胞生长因子（FGFs）是肌卫星细胞增殖和成肌分化的重要 调节因子，促进卫星细胞增殖并可逆转卫星细胞向肌纤维的成肌终末分化。 Myostatin 属于 TGF-β 超家族，在缺少 myostatin 小鼠和 myostatin 突变的牛中表 现的肌肉肥大和增生，很大程度上被认为是 myostatin 在卫星细胞增殖或分化时 的抑制作用被去除所致。Myostatin 很可能在骨骼肌修复过程中对各生长因子的 平衡起重要的作用。蛋鸡(Layer)和肉鸡(Broiler)是经过长期遗传选育形成的两个品系，在骨骼肌 生长发育性状上有很大的差异，肉用仔鸡骨骼肌生长的速度远远超过产蛋鸡， 所以蛋鸡和肉鸡是研究骨骼肌生长发育机制的理想模型。蛋鸡和肉鸡骨骼肌发 育性状的差异在出生后表现得最显著，这与两者骨骼肌组织中存在的卫星细胞 的特性具有很大的联系，本课题采用免疫荧光方法、RT-PCR 方法、同位素标记、 细胞培养等方法进行研究取得如下结果：1．建立和完善了分离、培养肌卫星细胞的技术方法；得到发育不同时期表 达标记基因 pax7 和 desmin 的卫星细胞。2．利用 RT-PCR 方法检测分离培养 24、48、72 小时后的蛋鸡和肉鸡胸肌卫 星细胞中有关骨骼肌发育调控因子的表达并进行比较。在 mRNA 表达水平没有 看到明显差异。3．利用Ci 3H-TdR标记增殖的卫星细胞，比较一定发育时期，蛋肉鸡卫星细 胞增殖速度的差异。结果表明，在相同的培养条件下，出雏 4 天的肉鸡卫星细 胞具有明显高于蛋鸡卫星细胞的生长速度。4．蛋肉鸡卫星细胞在细胞因子 bFGF (basic fibroblast growh factor) 和 Myostatin 处理后的形态学观察及相关基因的表达分析结果显示，bFGF 通过上 调 MyoD、下调 Myogenin，明显加快和延长卫星细胞的增殖、推迟分化进程。而 Myostatin 可能通过上调 p21 使细胞保持非增殖状态。 对于禽类骨骼肌卫星细胞的特性在国外已有较深入的研究，但利用蛋肉鸡长期自然选育而形成的差异——在骨骼肌发育上的性状差异，来进行骨骼肌发育 机理尤其是卫星细胞作用机理的研究还没有，本课题旨在此进行探索，为进行 蛋鸡和肉鸡在出生后骨骼肌发育性状的差异研究提供一定的依据，并将通过后 续的研究，为成体骨骼肌发育、卫星细胞在临床上的应用提供理论基础。关键词 骨骼肌 鸡卫星细胞 myostatin bFGFAbstractSkeletal muscle is one of the earliest formed tissues during the embryo development, so the investigation of myogenesis is important for understanding the whole process of embryo development.Satellite cell is a kind of cell which lies between the basal lamina and basement membrane of the myofibe. They play a key role in